关键词:
甲型流感病毒
噬斑形成试验
病灶形成试验
血凝抑制试验
抗病毒药物
中和抗体
摘要:
目的建立并优化一种甲型流感病毒(influenza A virus,FluA)滴度检测方法——病灶形成试验(focus forming assay,FFA),并与传统噬斑形成试验(plague forming assay,PFA)应用性能进行比较。方法比较3种过氧化物酶底物在免疫染色中的病灶效果,采用PFA法与FFA法在12孔板上探索FluA培养时间及噬斑形态,并在96孔板上确定不同亚型FluA的最佳孵育时间和优化病毒吸附量。比较优化后FFA法与PFA法的相关性,并将改进优化的FFA法应用于法匹拉韦体外抗病毒药效分析和不同亚型FluA中和抗体检测。结果研究发现,TRUEBLUE显色液是病灶显色的优选底物。FFA法较PFA法在病毒滴定检测中的灵敏度提升且检测时间缩短,2种方法检测结果具有较高的相关性。将96孔板替换12孔板后进行不同亚型FluA的FFA滴定,检出时间可缩短,并通过优化病毒吸附体积,可进一步减少血清样本的使用量。FFA法与PFA法测定的法匹拉韦抗流感病毒半数效应浓度无显著差异,且和荧光定量PCR法检测结果相一致。病灶减少中和试验和血凝抑制试验在抗FluA血清中和抗体滴度测定中也具有良好相关性。结论改进的FFA方法可为FluA滴度测定、抗病毒药物和广谱疫苗评价提供高通量且应用性能更优的实验技术与替代方案。