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关键词： 坤心宁颗粒   围绝经期综合征   质量标志物   UPLC/Q-TOF-MS技术   网络药理学   蛋白质组学   梓醇   地黄苷D   芍药苷   毛蕊异黄酮葡萄糖苷   (-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷   仙茅苷   淫羊藿苷   宝藿苷Ⅰ  

摘要： 目的采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC/Q-TOF-MS)技术、网络药理学及蛋白质组学方法,对坤心宁颗粒中的潜在质量标志物(quality markers,Q-Marker)进行预测分析,并建立坤心宁颗粒的质量评价方法。方法采用UPLC/Q-TOF-MS技术对坤心宁颗粒及给药后大鼠血浆中的化学成分(入血成分)进行解析;应用蛋白质组学技术挖掘坤心宁颗粒改善肾阴阳两虚型围绝经期综合征(perimenopausal syndrome,PMS)的关键信号通路;通过网络药理学对入血成分进行靶点预测,联合蛋白质组学差异通路分析,确定坤心宁颗粒的潜在Q-Marker;基于HPLC技术建立坤心宁颗粒中8种Q-Marker的定量方法,实现对坤心宁颗粒的质量评价。结果UPLC/Q-TOF-MS检测结合质谱数据及文献数据分析,鉴定出坤心宁颗粒中20种入血成分,结合网络药理学和蛋白质组学技术最终确定梓醇、地黄苷D、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、仙茅苷、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ共8种成分为坤心宁颗粒的QMarker;建立HPLC分析方法对15批坤心宁颗粒样品进行定量测定,结果显示各批样品中8种Q-Marker含量均保持稳定。结论借助多维分析技术确定了坤心宁颗粒中的8种潜在Q-Marker,为其全面质量控制提供有效手段。

关键词： 血府逐瘀汤   脑胶质瘤   网络药理学   分子对接   体外实验  

摘要： 目的联合使用网络药理学、分子对接技术和体外细胞实验探讨血府逐瘀汤治疗脑胶质瘤的活性成分及潜在作用机制。方法通过TCMSP、GeneCards等数据库预测血府逐瘀汤的作用靶点及脑胶质瘤的差异表达基因;STRING数据库构建血府逐瘀汤-脑胶质瘤蛋白互作(PPI)网络;关键靶基因进行GO及KEGG通路富集分析;Cytoscape软件构建药物-成分-靶点、药物-靶点-疾病网络;Discovery Studio软件进行分子对接验证及可视化;CCK8、EdU等生长增殖功能实验对上述生物信息学分析进行细胞实验验证。结果“药物-成分-靶点”网络表明血府逐瘀汤治疗脑胶质瘤的主要活性成分为黄芩素、汉黄芩素、β-胡萝卜素、β-谷甾醇、豆甾醇;血府逐瘀汤治疗脑胶质瘤涉及的GO生物过程包括细胞凋亡、磷酸化修饰等,涉及的KEGG通路包括高级糖基化终产物受体信号通路、致癌信号通路等;“活性成分-作用靶点-通路”网络显示血府逐瘀汤防治脑胶质瘤的核心作用靶点为PTGS2、ESR1、NOS2、GSK3β、MAPK14;分子对接结果证实主要活性成分黄芩素与核心靶点ESR1蛋白的相互作用能力较强;CCK8及EdU体外细胞实验结果表明黄芩素能够抑制胶质瘤细胞生长增殖,呈现出剂量依赖性,并在黄芩素10μmol·L^(-1)浓度时抑制效率最为显著;蛋白水平抑制ESR1的表达能够挽救黄芩素对胶质瘤细胞生长增殖的抑制(P<0.01)。结论血府逐瘀汤治疗脑胶质瘤具备多成分、多靶点、多通路的特点,其治疗机制可能通过黄芩素-ESR1发挥肿瘤抑制作用。

关键词： 输卵管性不孕   数据挖掘   网络药理学   用药规律   作用机制  

摘要： 目的:基于数据挖掘技术和网络药理学探讨中药治疗输卵管性不孕(TI)的用药规律及作用机制。方法:计算机检索中国知网(CNKI)、万方数据知识服务平台(WF)、维普数据库(VIP)、PubMed等数据库,时间选择2015年1月1日—2023年9月1日,纳入符合条件的中药治疗TI的相关文献。利用Excel软件统计中药性味归经;采用R语言统计中药使用频次,并对使用频次排名前20的中药进行关联规则和聚类分析。选用聚类分析得到的核心方,借助中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取核心方的有效成分及靶点,通过UniPort数据库进行靶点校正,在GeneCards数据库、人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索与TI相关的疾病基因,然后进行交集分析获得共同基因,借助Cytoscape3.10.0获得核心靶点蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图。将药物-疾病交集靶点导入Metascape数据库进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。采用Cytoscape3.10.0软件构建中药-药物成分-靶点-信号通路网络图。结果:共纳入方剂120首,包含262味中药,中药总使用频次为1480次,使用频次排名前20的中药有赤芍、当归、丹参、川芎、路路通等。药性以温、寒、平性为主,药味以苦、甘、辛味居多,归经主要为肝、肾、脾经。关联规则分析得到三棱-莪术、红花-当归等药物组合。聚类分析形成6个新的药物组合,第1类药物组合(莪术、三棱、路路通、皂角刺、丹参)可能为中药治疗TI的核心方。β-谷甾醇、槲皮素、木犀草素、隐丹参酮、漆黄素等是核心方治疗TI的关键成分,这些成分可能作用于肿瘤坏死因子(TNF)、肿瘤蛋白53(TP53)、白细胞介素(IL)6、雌激素受体1(ESR1)、B淋巴细胞肿瘤2(BCL2)等靶点,并通过癌症、缺氧诱导因子-1(HIF-1)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、FoxO等信号通路发挥作用。结论:临床治疗TI多用行气活血、化瘀止痛类中药,核心方可能通过癌症、HIF-1、MAPK及FoxO等信号通路参与调节细胞增殖、分化、炎症反应等过程,发挥对TI的治疗作用。

关键词： 冠心七味片   网络药理学   动脉粥样硬化   入血成分   脂代谢  

摘要： 以冠心七味片入血成分为基础,结合网络药理学筛选冠心七味片抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的关键通路,明确冠心七味片抗AS的作用机制,并通过细胞实验加以验证。采用HPLC-Q-Exactive-MS/MS技术对冠心七味片入血成分进行分析,确定化合物的精确质荷比,并利用二级质谱裂解碎片、文献比对所含成分进行全面分析,最终共鉴定出冠心七味片入血成分42个。利用Swiss Target Prediction数据库对其成分靶点预测。在疾病数据库Genecard、OMIM、Disgent中搜索AS靶点,用Venny 2.1.0软件绘制Venny图得到疾病靶点与成分靶点的交集靶点181个,利用String数据库分析蛋白质相互作用,并用Cytscape软件筛选得到核心靶点32个。DAVID数据库进行核心靶点的GO(Gene Ontology)富集分析和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析,发现冠心七味片抗AS的通路主要包括脂质代谢与动脉粥样硬化(lipid metabolism and atherosclerosis)、高级糖基化终末产物-受体信号通路(AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications)等。将核心靶点和核心化合物进行分子对接发现,冠心七味片中隐丹参酮、丹参酮ⅡA与TNF、PPARγ、AKT1、PTG2等靶点结合较好。使用人hl-7702肝细胞构建脂滴模型,验证冠心七味片调控脂质代谢与动脉粥样硬化的关键通路。这项研究初步鉴定了冠心七味片治疗AS的潜在药效成分并预测了作用通路,对冠心七味片调节脂质代谢与动脉粥样硬化的关系进行体外实验验证,为该方药效物质基础及作用机制的深入研究提供参考。本实验经过内蒙古医科大学医学伦理委员会批准(编号:YKD202401262)。

关键词： 加味香薷口服液   泄泻   UPLC-Q-Exactive-MS/MS   网络药理学   分子对接  

摘要： 目的:基于UPLC-Q-Exactive-MS/MS技术和网络药理学探讨加味香薷口服液治疗泄泻的有效成分与作用机制。方法:采用UPLC-Q-Exactive-MS/MS技术鉴定加味香薷口服液的化学成分,通过Swiss Target Prediction数据库预测作用靶点。在OMIM平台、DisGeNET平台和GeneCards数据库检索泄泻的靶点,绘制韦恩图获取其与化学成分的交集靶点。通过STRING 12.0数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,利用Cytoscape 3.9.1软件的Network Analyzer插件进行拓扑分析,从而筛选核心靶点。通过Metascape数据库进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。借助Cytoscape 3.9.1软件构建“化学成分-靶点-KEGG通路”网络,根据Degree值筛选关键成分。最后,利用AutodDock 4.2.6软件进行分子对接。结果:加味香薷口服液含有31个化学成分,对应于681个靶点。泄泻靶点1019个,两者的交集靶点107个。拓扑分析得到10个核心靶点,包括白蛋白(albumin,Alb)、蛋白激酶B(serine/threonine protein kinase AKT1,AKT1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、肿瘤蛋白p53(tumor protein 53,TP53)等。GO分析主要富集于细胞对金属离子的反应、激酶活性的正向调节、蛋白酪氨酸激酶活性等。KEGG通路主要包括PI3K-Akt信号通路、内分泌抵抗、MAPK信号通路等。关键成分(川陈皮素、葛根素、女贞苷、橙皮苷和迷迭香酸)和核心靶点(EGFR、AKT1和TNF)的分子对接显示,两者具有较强的结合能力。结论:加味香薷口服液可能通过川陈皮素、葛根素、女贞苷等成分,作用于EGFR、AKT1、TNF等靶点,从而发挥治疗泄泻的作用。

关键词： 猫爪草   结直肠癌   网络药理学   分子对接  

摘要： 以网络药理学和分子对接技术探讨猫爪草治疗结直肠癌的作用机制.通过TCMSP数据库检索筛选出符合条件的猫爪草的主要活性成分,并用Swiss TargetPrediction数据库预测其潜在靶点.利用DisGeNET和GeneCards数据库搜索筛选符合条件“colorectal cancer”的靶点,利用Venn2.1.0取交集.使用Cytoscape_v3.10.1绘制“活性成分-结直肠癌”网络图.通过STRING数据库构建PPI网络,导入Cytoscape_v3.10.1进行分析并筛选出关键靶点.运用微生信平台对关键靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析,使用GEPIA数据库分析关键靶点在癌组织中和癌旁组织表达的差异.使用分子对接技术预测猫爪草中的核心活性成分和关键靶点能否结合.结果表明,猫爪草治疗结直肠癌的有效成分有9种;共同作用靶点有54个;PPI网络构建分析显示,SRC,EGFR,HIF1A等15个靶点为关键靶点,并且其涉及的信号通路主要在癌症途径、癌症中的蛋白聚糖、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性、PI3K-Akt信号通路等.GEPIA分析发现,BCL2L1,GSK3B,MMP9在结直肠癌的组织中相对于癌旁组织呈现出高表达;分子对接显示核心成分Truflex OBP,CLR,7-O-Methyleriodictyol与BCL2L1,GSK3B,MMP9蛋白均具有良好的亲和力.猫爪草可以通过多个靶点和途径治疗结直肠癌,为结直肠癌的治疗提供了新契机.

关键词： 甲状腺癌   舒瘀消疬方   网络药理学   分子对接  

摘要： 目的:运用网络药理学和分子对接探讨舒瘀消疬方治疗甲状腺癌(TC)的潜在作用机制。方法:利用TCMSP、Symmap数据库获取并筛选舒瘀消疬方的主要活性成分及药物作用靶点,并通过GeneCards数据库(筛选条件为Relevance score得分≥20)、TTD数据库、Drugbank数据库、PharmGKB数据库中获取TC的相关疾病靶点,整理以后剔除重复靶点,并与舒瘀消疬方的潜在靶点取交集,获得舒瘀消疬方治疗TC的核心靶点。利用Cytoscape 3.7.1软件、STRING数据库分别构建舒瘀消疬方治疗TC的潜在治疗靶点的“药物-成分-靶点”网络图和蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图。最后通过DAVID数据库对潜在治疗靶点进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并将富集结果进行可视化。通过Cytoscape 3.7.1软件筛选出核心有效成分和靶点,采用分子对接技术将主要活性成分与核心靶点进行分子对接。结果:舒瘀消疬方中各药经筛选后对应1224个药物作用靶点,从多个疾病数据库中共获得1271个疾病相关靶点,取交集获得潜在基因作用靶点203个。富集分析结果推测舒瘀消疬方主要通过癌症途径、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等相关通路发挥作用;分子对接结果显示舒瘀消疬方中黄芩素、山姜素与细胞色素P450家族19亚家族A成员1(CYP19A1)、雌激素受体2(ESR2)结合性较好。结论:舒瘀消疬方可以通过多成分、多靶点、多通路治疗TC,为临床应用舒瘀消疬方治疗TC提供了一定的理论依据。

关键词： 动脉粥样硬化   青蒿素   网络药理学   分子对接   作用机制  

摘要： 目的:利用网络药理学与分子对接技术预测青蒿素治疗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、PubChem和Swiss Target Prediction数据库获取青蒿素的作用靶点,从GeneCards、DisGeNET平台获取与AS相关的靶点,通过基因映射得到青蒿素干预AS的靶点。采用DAVID数据库对靶点进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并利用微生信平台进行可视化。利用String数据库和Cytoscape3.10.0软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并进行聚类分析及网络拓扑属性分析筛选出关键靶点,之后构建中药成分-靶点-通路-疾病网络,选出与疾病通路关联较多的关键靶点。最后通过AutoDock软件将青蒿素和靶点进行分子对接,依据结合能评价结合活性。结果:共获得青蒿素靶点109个,AS靶点1217个,青蒿素干预AS的靶点35个。GO富集分析提示青蒿素干预AS的靶点主要参与了信号转导、异生物质的新陈代谢、细胞增殖的正向调控等生物过程(BP),与质膜、细胞质、大分子复合物等细胞组分(CC)相关,涉及类固醇羟化酶活性、蛋白激酶活性、氧化还原酶活性等分子功能(MF)。KEGG富集分析表明青蒿素干预AS的靶点主要干预了丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、松弛素信号通路、癌症信号通路、流体剪切应力(FSS)与AS、肾素-血管紧张素(Ras)信号通路等与AS治疗相关的通路。分子对接结果表明青蒿素与靶点MAPK8、表皮生长因子受体(EGFR)、MAPK14之间具有良好的结合力。结论:青蒿素可能通过干预MAPK信号通路、松弛素信号通路、癌症信号通路、流体剪切应力与AS、Ras信号通路等实现对AS的治疗作用,MAPK8、EGFR、MAPK14可能是青蒿素治疗AS的核心靶点。

关键词： 膝骨关节炎   金毛狗脊   乌梢蛇   脊蛇祛湿胶囊   分子对接  

摘要： 目的:通过构建“药物-成分-疾病-靶点”的相互作用网络,探讨脊蛇祛湿胶囊中君药治疗膝骨关节炎(keen osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:通过Herb数据库及文献报道对金毛狗脊与乌梢蛇的化合物进行筛选,接着在PubChem数据库中下载化合物的分子结构式,把它们导入SwissTargetPrediction数据库得到化合物对应靶点,在GeneCards、OMIM数据库得到疾病有关靶点;应用在线作图软件Venny2.1.0得到药物与KOA的交集靶点;运用Cytoscape3.10.0软件建立“药物-成分-交集靶点”网络图;利用String平台和Cytoscape3.10.0软件作出蛋白与蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络图;在DAVID数据库对交互靶点进行GO和KEGG富集分析;最后运用CB-DOCK2对主要成分和关键靶点进行分子对接。结果:共得到药物靶点562个,KOA靶点1244个,两个交互靶点126个;药物的主要成分是亚油酸、亚油酸甲酯、山柰酚、brachy stemidines A;关键靶点是IL-6、STAT3、CTNNB1、AKT1、MMP9;KEGG富集分析一共得到157条通路,与KOA有关的通路是脂质和动脉粥样硬化、AGE-RAGE信号通路、癌症通路。分子对接得出,主要成分皆能与关键靶点结合,且都有很好的结合能力。结论:本研究利用网络药理学方法揭示了金毛狗脊和乌梢蛇对KOA的多靶点、多通路治疗机制,为KOA临床治疗提供了理论基础。

关键词： 药理学   实验教学   调研   教学改革  

摘要： 药理学是研究药物与机体间相互作用规律及其药物作用机制的一门科学。实验教学是药理学教学的重要组成部分,采用问卷调查法对我校不同专业不同层次的学生进行药理学实验教学质量现状调查分析,了解学生对药理学实验的重视程度及认可度,简述了药理学实验教学中的实验对象的来源分析,实验的总体态度及教学效果的评价,以及学时和实验过程安排的合理性等因素对教学效果的影响;分析其不足并寻找相应策略,以期为药理学实验教学改革的发展与完善提供依据。