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关键词： 水合橙皮内酯   枳壳   增强免疫   斑马鱼模型   网络药理学  

摘要： 目的 基于模式生物斑马鱼结合网络药理学,研究枳壳的活性成分水合橙皮内酯增强免疫作用及作用机制。方法建立2种斑马鱼免疫低下模型:以雷帕霉素建立尾部中性粒细胞数目减少模型,以酒石酸长春瑞滨建立静脉血管中巨噬细胞荧光强度减弱模型,检测水合橙皮内酯(10、20、50、100、200μg·mL^(-1))各给药组斑马鱼尾部中性粒细胞数目、斑马鱼尾部静脉血管中巨噬细胞荧光强度,计算中性粒细胞增长率和巨噬细胞改善率。基于网络药理学预测水合橙皮内酯增强免疫作用的机制,使用Pharm Mapper、中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)进行水合橙皮内酯靶点筛选,运用Gene Cards数据库和OMIM数据库检索增强免疫相关靶点,运用Venny2.1将上述两组靶点取交集后导入String数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析,进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,在Cytoscape3.9.1软件中构建水合橙皮内酯的增强靶点PPI网络,并以节点度值的中位数筛选关键靶点。结果 与模型组相比,水合橙皮内酯可显著增加斑马鱼尾部中性粒细胞数目(P<0.01、0.001)、静脉血管中巨噬细胞荧光强度(P<0.05),证明水合橙皮内酯具有抗雷帕霉素、酒石酸长春瑞滨引起的免疫力低下作用,呈剂量相关性。水合橙皮内酯增强免疫的作用机制可能与AKT1、EGFR、SRC、MMP9、ESR1等关键靶点及PI3K-Akt、Rap1、AGE-RAGE等信号通路有关。结论 水合橙皮内酯具有增强免疫作用,可能通过调控PI3K-Akt、Rap1、AGE-RAGE等信号通路发挥作用。

关键词： 网络药理学   通关藤口服液   胃癌   分子对接   EGFR/PI3K/AKT/mTOR信号通路  

摘要： 目的利用网络药理学方法、分子对接及体外细胞实验探究通关藤(marsdenia tenacissima,MT)口服液抑制胃癌(gastric cancer,GC)增殖的潜在作用机制。方法通过搜索文献、检索TCMSP、Swiss Target Prediction数据库完成MT化学成分、靶点基因的收集;采用Gene Cards数据库获取疾病相关靶点;利用STRING平台和Cytoscape软件构建交集靶点的蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI);采用Metascape网络平台进行GO和KEGG信号通路分析;运用Auto Dock对部分活性成分与潜在靶点进行分子对接验证;采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测MT口服液对GC细胞增殖的抑制作用,分别与厄洛替尼和阿帕替尼联用的协同作用、流式细胞术检测MT口服液诱导GC细胞凋亡及对胃癌细胞周期的影响;采用RT-qPCR法检测MT口服液对GC细胞周期、凋亡相关基因表达的影响;采用Western blot法验证网络药理学和分子对接筛选的靶点。结果共得到MT主要活性成分17个,胃癌关键靶点1880个,主要信号通路167条。体外实验结果表明,40~200 mg/m L的MT口服液可有效抑制GC细胞增殖(P<0.01),与厄洛替尼和与阿帕替尼联用时,具有协同效应。40~160 mg/m L的MT口服液可诱导胃癌细胞凋亡(P<0.01),阻滞细胞周期G0/G1期(P<0.01)。RT-qPCR结果显示,通关藤口服液可以上调B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,BAX)的表达量,下调Bcl-2、细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependent kinase,CDK)4、CDK6(P<0.05)的表达量。Western blot结果显示MT口服液,抑制磷酸化-表皮生长因子受体(phosphorylated-epidermal growth factor receptor,p-EGFR)、磷酸化-磷脂酰肌醇-3激酶(phosphorylated-phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化AKT丝氨酸/苏氨酸激酶(p-AKT)、磷酸化-雷帕霉素激酶的机制靶点(phosphorylated-mechanistic target of rapamycin kinase,p-mTOR)的表达水平,降低p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT1、p-mTOR/m TOR比值;同时上调BAX、肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,P53)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A/P21),下调Bcl-2、CDK4、CDK6(P<0.05)水平。结论MT口服液可有效抑制胃癌细胞的增殖,阻滞细胞周期并诱导胃癌细胞凋亡,并提高小分子靶向药物厄洛替尼和阿帕替尼治疗胃癌的敏感性。其机制与经调控PI3K/AKT/m TOR信号通路上调BAX、P53、P21,下调Bcl-2、CDK4、CDK6的表达,并抑制EGFR信号通路有关,实验结果验证了网络药理学和分子对接的结果。

关键词： 青钱柳   网络药理学   分子对接   镇痛  

摘要： 目的探明青钱柳镇痛作用机制,为青钱柳临床应用和药物开发提供科学指引。方法通过中药网络药理学的研究方法探讨青钱柳镇痛作用机制。利用分子对接验证核心靶点与活性化合物的结合能力。用纯化水对青钱柳叶进行恒温回流提取。用ELISA试剂盒检测青钱柳叶水提物降低小鼠疼痛指标以及对核心靶点的抑制情况。结果青钱柳镇痛的核心靶点为IL-6、COX-2和MMP-9。核心靶点与活性化合物均能较好结合。青钱柳叶水提物能较好地降低小鼠疼痛指标和抑制核心靶点IL-6、COX-2以及MMP-9。结论青钱柳的主要镇痛机制可能通过抑制核心靶点IL-6、COX-2和MMP-9,从而达到镇痛的效果。

关键词： 大黄-桃仁药对   血瘀证   活血化瘀   分子机制   中药功效物质  

摘要： 本研究整合功效实验、网络药理学和HPLC探讨大黄-桃仁药对(Rhei Radix et Rhizoma-Persicae Semen combination,RRR-PS)配伍发挥活血化瘀作用的功效物质群及分子作用机制。建立大鼠血瘀证模型,进行血液流变指标和凝血四项综合评价,结果显示,与模型组相比,RRR-PS组大鼠的全血黏度、血沉、红细胞聚集指数等指标均明显回调(P<0.01)。网络药理学发现RRR-PS通过作用于钙调蛋白1(CALM1)、一氧化氮合酶2(NOS2)、糖皮质激素受体(NR3C1)等靶点,调控血小板活化、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、血管内皮生长因子(VEGF)等信号通路发挥活血化瘀的功效,并发现关键成分:番泻苷B、儿茶素、大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、没食子酸。运用HPLC探究关键成分的溶出率,结果发现RRR-PS配伍后,儿茶素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚4种主要功效物质含量均显著提高(P<0.01)。综上所述,RRR-PS活血化瘀功效显著,其作用机制与促进血管生成、抗凝血、抗血栓、抗炎有关;功效发挥与RRR-PS配伍后,溶剂系统改变,儿茶素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚大量溶出相关。研究结果可进一步为后续RRR-PS配伍活血化瘀功效物质及作用机制研究提供参考。动物实验已获得陕西中医药大学实验动物委员会批准(批准号:SUCMDL20210309002)。

关键词： 清肝颗粒   超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱   定性分析   裂解途径   网络药理学   分子对接   黄疸性肝炎   多成分含量测定  

摘要： 目的:阐明清肝颗粒治疗黄疸性肝炎的物质基础,建立科学的质量控制方法。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术对清肝颗粒的活性成分进行表征分析;以清肝颗粒中鉴定出的活性成分为目标对象,进行网络药理学和分子对接研析,并建立多成分含量测定方法。结果:共鉴定出134个成分,其中黄酮类50个、糖苷类8个、苯丙素类17个、三萜类11个、萜类6个、氨基酸类11个、有机酸类9个、脂肪酸类7个、生物碱类8个、挥发油类5个、醌类1个,并解析了黄酮类、萜类、有机酸类、生物碱类以及糖苷类代表性化合物的裂解规律。通过网络药理学分析筛选出8个核心靶点。预测了主要活性成分为异甘草素、腺苷、甘草素、鸟苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸等。其次,依据可测性、特征性以及活性相关性的原则,建立了3,4-二咖啡酰奎宁酸、(R,S)-告依春、甘草素、4,5-二咖啡酰奎宁酸和甘草酸铵等5个潜在活性成分的含量测定方法。结论:筛选出了清肝颗粒治疗黄疸性肝炎的主要药效活性成分,并展开定量研究,可为清肝颗粒质量控制水平的提高提供了依据。

关键词： 院内制剂   柏苓化浊丸   网络药理学   炎症性精液不液化症   炎症因子  

摘要： 本研究以国医大师林天东研制的院内制剂柏苓化浊丸为研究对象,运用网络药理学方法探究院内制剂柏苓化浊丸治疗炎症性精液不液化症可能的作用机制。通过TCMSP数据库,从院内制剂柏苓化浊丸中筛选得到79个有效活性成分,551个疾病基因靶点,与前列腺炎相关疾病共同存有113个不重复相交集的靶点基因。院内制剂柏苓化浊丸主要分清浊,清湿热,其活性成涉及的核心靶点参与了介导免疫反应,通过与不同类别的细胞受体结合激活,控制包括基因转录、免疫反应、细胞粘附、细胞周期进程、细胞凋亡、迁移和转化在内的生物活性进程。因此,院内制剂柏苓化浊丸的网络药理学分析可为进一步深入研究柏苓化浊丸作用机理提供理论基础和科学依据,助推基于院内制剂柏苓化浊丸的创新药物开发。

关键词： 网络药理学   小儿定喘颗粒   呼吸道合胞病毒   活性成分   靶点   作用机制  

摘要： [目的]本研究初步探究了小儿定喘颗粒抗呼吸道合胞病毒的药理作用,并通过网络药理学及生物信息学技术探讨小儿定喘颗粒治疗呼吸道合胞病毒肺炎(RSV)的作用机制。[方法]通过建立RSV感染的A549细胞模型以考察小儿定喘颗粒抗RSV的治疗效果;利用中药系统药理学数据库(TCMSP)获取小儿定喘颗粒的主要化学成分及作用靶点,利用Uniprot数据库对获取的作用靶点进行规范化处理;通过GeneCards及OMIM数据库获取RSV相关靶点;利用Venny 2.1.0绘图网站构建Venn图,得到小儿定喘颗粒与RSV的交集靶点;应用String平台构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;通过David数据库对交集靶点进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,使用微生信网站绘制结果气泡图,相关结果采用Cytoscape 3.9.0软件进行可视化及网络拓扑结构分析。使用分子对接及酶联免疫吸附实验对上述预测核心靶点进行验证。[结果]体外细胞实验表明小儿定喘颗粒对RSV诱导的细胞病变具有抑制作用,经过数据整理及分析共筛选出小儿定喘颗粒的主要化学成分194个,潜在作用靶点282个,其中涉及RSV靶点135个。“中药-成分-疾病靶点”网络显示,槲皮素、山柰酚、异鼠李素等是小儿定喘颗粒治疗RSV的主要活性成分,肿瘤坏死因子(TNF)、白蛋白(ALB)、白细胞介素-6(IL-6)、RAC-α-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、白细胞介素-1β(IL-1β)等是小儿定喘颗粒治疗RSV的核心靶点。通过GO功能富集分析得到822条生物进程条目,138条分子功能条目,89条细胞成分条目,KEGG富集分析发现核心靶点主要作用于TNF、IL-17、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)等信号通路,分子对接、酶联免疫吸附实验进一步验证了上述结果。[结论]初步揭示了小儿定喘颗粒可能通过多成分、多靶点和多通路发挥治疗RSV的作用,为拓宽其临床应用提供理论基础。

关键词： 网络药理学   中医药   研究方法   数据质量   网络靶标   中药重定位   中药处方优化   中药质量控制  

摘要： 网络药理学是一门用于阐释疾病和药物之间分子网络的交叉学科,其“多成分—多靶点—多疾病”的宏微观相结合的研究模式与中医整体观一致,有助于促进中医药的现代化发展。由于网络药理学的研究路径固化、研究结果“同质化”、数据质量良莠不齐、技术方法选择存在专业壁垒,致其发展正陷入停滞不前的困境中。为了解决这些困境,需要采取一系列措施。首先,需要创新研究路径,拓展网络药理学的应用领域,如中药质量控制、中药重定位、不良反应预测等,以发挥其更广泛的应用潜能。其次,需要提高数据质量,改善数据来源的准确性、数据处理的规范性、数据选择的精准性和保障数据的中医药特征,避免数据同质化现象。此外,应根据研究目的优化技术方法选择。最后希望通过加强跨学科合作,推动网络药理学在中医药领域的应用。

关键词： 网络药理学   分子对接   半枝莲   黄酮   肝细胞癌   增殖抑制  

摘要： 目的网络药理学方法探究半枝莲黄酮类成分治疗肝细胞癌的作用机制及分子对接技术验证。方法通过TCMSP、SwissTargetPrediction、OMIM、BioGPS等数据库筛选黄酮类成分、肝特异性靶点;构建肝特异性靶点蛋白互作网络、筛选核心模块和基因;进行肝特异性靶点生物通路富集分析;将黄酮类成分和核心蛋白靶点在SwissDock平台进行分子对接。结果黄酮类成分36个,肝特异性靶点135个,核心基因4个;关键生物通路均与肝细胞癌的增殖抑制相关。黄酮成分与核心靶点有较强的结合活性。结论半枝莲黄酮类成分抗肿瘤作用可能是通过多成分-多靶点阻滞肝癌细胞的有丝分裂G1/S细胞周期,抑制肝细胞癌增殖。

关键词： 芦荟大黄素   Ⅱ型糖尿病   网络药理学   分子对接  

摘要： 该文通过网络药理学结合分子对接的技术研究了芦荟大黄素改善Ⅱ型糖尿病的作用机制。利用数据库平台筛选出芦荟大黄素的潜在靶点和改善治疗Ⅱ型糖尿病的相关靶点,将二者取交集获得芦荟大黄素改善Ⅱ型糖尿病的潜在靶点;构建共同靶点间的蛋白互作网络,并对共同靶点进行GO功能注释和KEGG通路富集分析;通过筛选主要通路并构建“芦荟大黄素-Ⅱ型糖尿病-通路”网络图,对芦荟大黄素与通路及各通路所富集的靶点间的联系进行可视化分析,通过分子对接,研究芦荟大黄素与关键靶点的结合机制。结果表明,芦荟大黄素具有63个改善治疗Ⅱ型糖尿病的相关靶点,并根据蛋白互作网络筛选出AKT1、PIK3CA、HRAS和MAPK8等22个核心靶点,这些靶点主要富集在PI3K/AKT和胰岛素抵抗等信号通路,芦荟大黄素主要通过氢键、范德华力和π-π相互作用等分子间作用力与靶点结合,从而调控靶点的表达,改善Ⅱ型糖尿病。