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关键词： 缺血性中风   活络效灵丹   网络药理学   分子对接   作用机制  

摘要： 目的:运用网络药理学方法探讨活络效灵丹治疗缺血性中风的作用机制。方法:利用中医药证候关联数据库(SymMap)、中药综合资源数据库(TCM-ID)、草药成分和靶标数据库(HIT)以及SwissTargetPrediction数据库检索活络效灵丹的活性成分、作用靶点;通过人类基因综合数据库(GeneCards)、比较毒理基因组学数据库(CTD)、基因组学数据库(DisGeNET)、基因表达综合数据库(GEO)等筛查缺血性中风的疾病靶点与差异表达基因;利用UpSetR对活络效灵丹作用靶点、差异表达基因和缺血性中风疾病靶点取交集,筛选出活络效灵丹治疗缺血性中风相关靶点;通过Metascape数据库对相关靶点进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析。利用Cytoscape 3.9.10软件构建蛋白质互作网络和药物-活性成分-靶基因网络,筛选出活络效灵丹治疗缺血性中风的核心成分和核心靶点。通过单样本基因集富集分析对GSE16561数据集中正常和缺血性中风样本间的免疫细胞浸润差异进行分析,并分析核心靶点与免疫细胞浸润水平的相关性。采用分子对接验证核心靶点与活性成分的亲和性。结果:共获得活络效灵丹活性成分226个,靶点1541个,缺血性中风靶点712个,差异表达基因3136个。取交集后,共获得活络效灵丹抗缺血性中风靶点82个。GO富集分析发现,活络效灵丹治疗脑缺血性中风的靶点主要参与炎症反应、脂多糖反应、细胞因子产生的正调节、激素反应和细胞迁移的正调节等生物过程。KEGG分析提示,活络效灵丹治疗缺血性中风的作用机制与癌症通路、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和白细胞介素(IL)-17信号通路等有关。蛋白质互作网络和药物-活性成分-靶基因网络得到C-C基序趋化因子配体2(CCL2)、IL-1β和基质金属蛋白酶9(MMP9)等核心靶点和槲皮素、丹参酮ⅡA、白藜芦醇、姜黄素、丹酚酸、阿魏酸等10种核心成分。Pearson相关性分析显示,IL-1β和MMP9与中性粒细胞、内皮细胞等免疫细胞浸润水平相关。分子对接结果显示,IL-1β和MMP9与活络效灵丹核心成分结合稳定。结论:活络效灵丹中槲皮素、丹参酮ⅡA、白藜芦醇、姜黄素、丹酚酸和阿魏酸等有效成分能够作用于IL-1β和MMP9等核心靶点,通过调控癌症通路、PI3K/Akt和IL-17等信号通路治疗缺血性中风。

关键词： 护理药理学   高级护理人才   教育改革   生长点  

摘要： 随着医疗健康行业的迅猛进步,培育护理专业人才变得格外关键。护理药理学这门科目在教育上不但关乎护理工作者的职业发展,还直接影响患者的治疗安全性及成效。本项研究深究了目前护理药理学的教育现状,指出了其在教学内容及方式上的缺陷,这些不足之处制约了学生把书本知识应用于实际工作的技能。据此,文章提出了若干革新措施,设置“生长点”激发“研究性学习”在《护理药理学》教学中的应用,里面涵盖了课程内容的刷新、提高操作实操的教学环节比例及引入多样化的教学手段。实施这些方案的目标是增强护理学生在药理学方面的知识掌握和临床使用技能,以促使更多高级护理人才的成长。这场改革对于提升护理工作的品质产生积极效应,还为护理教学的进步开辟了新径。

关键词： 课程思政   药理学   课程   教学改革  

摘要： 全国高校思想政治工作会议当中提出,未来必须要做好高校思想政治工作,充分把握好课堂教学这一思想政治工作的关键渠道,从而让各类课程与思想政治理论课成为同向同行,达成协同效应,这对教学质量与教学效率的优化具有重要作用和关键意义。高校教学期间,必须要将思政课程完成课程思政转化,构建出一种全新的教育模式,终极目标在于打造出价值引导的融汇贯通教学模式,这对改善我国高校教学质量具有重要意义。

关键词： 虎杖   雏鹅   痛风   槲皮素   山奈酚   网络药理学   分子对接  

摘要： 为了探讨虎杖防治痛风的潜在作用机制,试验采用网络药理学方法,通过中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)筛选出虎杖的活性成分、作用靶点,通过GeneCards数据库获取痛风的相关靶点;取虎杖与痛风的相交靶点,用Cytoscape 3.8.2软件构建“中药-活性成分-靶点-疾病”网络;用String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)关系图,找出关键靶点;对靶点进行KEGG信号通路富集分析,构建“活性成分-靶点-通路”网络;选取关键靶点和主要活性成分,用Autodock 1.5.6软件进行分子对接;建立雏鹅痛风模型,用qRT-PCR检测相关靶蛋白的mRNA表达,验证虎杖的网络药理学分析结果。结果表明:共得到虎杖活性成分10个,作用靶点183个,痛风相关靶点1557个,虎杖防治痛风潜在靶点71个。PPI分析发现关键靶点8个,分别为RELA、MAPK1、Akt1、NFKBIA、TNF、IL-6、MAPK14及HSP90AA1等,主要富集于TNF、NF-κB、Toll样受体、NOD样受体和HIF-1等5条信号通路中。RELA、MAPK1、NFKBIA及TNF等靶点的结合能力较强,能与虎杖中槲皮素、木犀草素稳定结合。虎杖能显著提高痛风雏鹅体重和治愈率(P<0.05),显著降低血清中尿酸和肌酐含量及TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子水平及肾脏中RELA、TNF及MAPK1等mRNA相对表达量(P<0.05)。说明虎杖可能通过槲皮素、山奈酚等活性成分调控痛风过程中RELA、MAPK1、NFKBIA及TNF等靶点,从而降低炎症因子活性,减轻炎症反应,恢复肾脏功能。

关键词： 亚砷酸钠   肝胰岛素抵抗   二型糖尿病   银杏叶提取物   过氧化物酶体增殖物激活受体γ   葡萄糖转运蛋白4  

摘要： [背景]砷暴露是我国常见的重要环境与职业有害因素,砷暴露所致的胰岛素抵抗(IR)对人群健康危害已引起广泛关注。[目的]基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)/葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)通路探讨砷暴露所致肝脏IR的部分机制,并探讨银杏叶提取物(GBE)对砷暴露所致肝脏IR的作用及其机制。[方法]通过网络药理学预测药物的作用靶点进行分析,并进行体内外实验验证。体内实验:将48只SPF级C57BL/6J雄性小鼠分为对照组、50 mg·L^(−1)NaAsO_(2)模型组(NaAsO_(2))、50 mg·L^(−1)NaAsO_(2)+10 mg·kg^(-1)GBE干预组(NaAsO_(2)+GBE)、10 mg·kg^(-1)GBE共4组,每组12只。染毒方式为自由饮用含50 mg·L^(−1)NaAsO_(2)的纯净水,干预方式为每周1次腹腔注射含10 mg·kg^(-1)GBE的生理盐水。染毒6个月后,进行血糖检测、腹腔注射葡萄糖耐量实验(IPGTT)、胰岛素耐量实验(ITT)等实验,处死小鼠后取血清及肝脏组织,肝脏组织病理切片,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清胰岛素水平、肝脏组织糖原含量及葡萄糖含量,蛋白免疫印记(WB)检测PPARγ及GLUT4蛋白表达。体外实验:使用肝癌细胞(HepG2)细胞,分为对照组、8μmol·L^(−1)NaAsO_(2)组(NaAsO_(2))、8μmol·L^(−1)NaAsO_(2)+200 mg·L^(−1)GBE干预组(NaAsO_(2)+GBE)、􀀁200 mg·L^(−1)GBE组(GBE),共4组。ELISA法检测细胞糖原及葡萄糖水平,WB法检测PPARγ及GLUT4蛋白表达。[结果]网络药理学发现GBE和PPARγ具有强烈的结合效应。体内实验中,小鼠的一般指标及血糖相关指标提示,与对照组相比,NaAsO_(2)组血糖水平升高,而NaAsO_(2)+GBE组小鼠血糖水平低于NaAsO_(2)组(P<0.01)。病理切片提示,砷暴露组(NaAsO_(2)组和NaAsO_(2)+GBE组)肝脏结构损伤较重,染色深浅不一,部分肝细胞坏死并有弥漫性红细胞出现。体外实验及体内实验发现,与对照组相比,NaAsO_(2)组糖原合成的能力及葡萄糖摄取的能力下降,而NaAsO_(2)+GBE组可以改善这个状况,差异有统计学意义(P<0.01);WB法发现PPARγ表达受到了抑制,细胞膜上的GLUT4水平降低,而这些改变在NaAsO_(2)+GBE组中均有缓解,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]本研究结果提示GBE通过调控PPARγ/GLUT4通路拮抗砷暴露所致的肝脏IR,GBE对砷暴露所致肝脏IR具有一定保护作用,PPARγ可能是砷暴露所致肝脏IR的潜在治疗靶点。

关键词： 川芎   挥发油   心绞痛   网络药理学   动物实验  

摘要： 目的 基于网络药理学研究川芎挥发油抗心绞痛的作用机制,并用动物实验加以验证。方法 通过水蒸气蒸馏法、气相色谱-质谱联用仪(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)、口服利用度(oral bioavailability, OB)筛出挥发油成分;使用Pubchem、SwissTarget、DisGeNET、DrugBank数据库和R语言分别获取挥发油成分的靶点、心绞痛的靶点和交集靶点;蛋白质-蛋白质相互作用通过String数据库完成;使用R语言的ClusterProfiler包对交集靶点进行基因本体分析(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)富集分析,并通过Cytoscape构建中药-成分-靶点-通路网络;借助AutoDock vina 1.2.3、Pymol 3.0、Discovery Studio 2016软件进行分子对接,分析关键靶点和主要挥发油成分的亲和力。最后,通过动物实验进一步验证川芎挥发油对心绞痛的治疗效果。结果 网络药理学研究共得到10个挥发油成分和22个关键靶点,这些靶点与神经递质、突触膜上的受体、物质代谢等生物过程以及神经活性配体-受体相互作用、视黄醇代谢、药物代谢-细胞色素P450等通路密切相关;分子对接结果表明3-butylidenephthalide、Alpha-selinene、Trans-ligustilide等挥发油成分与多个关键靶点结合发挥治疗作用。动物实验表明川芎挥发油通过调节射血分数(ejection fraction, EF)、短轴缩短率(fractional shortening, FS)、左室收缩末内径(left ventricular internal diameter in systole, LVIDs)和每搏输出量(stroke volume, SV)水平以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、肌酸激酶(creatine kinase, CK)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)活性,促进受损心肌细胞中ADRA1A、CHRM5蛋白的表达,改善心肌纤维状态,减小细胞间隙,减少炎性细胞浸润表现出保护心肌的作用。结论 川芎挥发油具有有效保护受损心肌组织,治疗心绞痛的作用。

关键词： 枳实栀子豉汤   抑郁症   网络药理学   作用机制  

摘要： 目的通过网络药理学预测枳实栀子豉汤抗抑郁的作用靶点及信号通路,并进行实验验证。方法采用中药系统网络药理学数据库与分析平台筛选枳实栀子豉汤的活性成分并预测其作用靶点,通过OMIM、GeneCards检索抑郁症的潜在疾病靶点,选取成分与疾病的交集靶点作为蛋白靶点库,采用STRING获取交集靶点蛋白相互作用的网络,通过Cytoscape软件对数据进行可视化分析,构建活性成分-预测靶点-信号通路网络。通过蛋白质-蛋白质相互作用分析枳实栀子豉汤的关键靶点并进行动物实验。同时,采用DAVID数据库进行基因本体(GO)和京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析,综合评价枳实栀子豉汤抗抑郁的作用机制。30只SD大鼠适应性喂养1周后,随机分为正常组6只,造模组24只。除正常组外,实验大鼠均接受慢性温和不可预知应激造模,确认造模成功后,将造模组按随机数字表法分为四组,高剂量组(13.32 g/kg枳实栀子豉汤)、中剂量组(6.66 g/kg枳实栀子豉汤)、低剂量组(3.33 g/kg枳实栀子豉汤)、模型组,每组6只,对其进行动物行为学和蛋白质印迹法实验。结果筛选出38个枳实栀子豉汤的有效活性成分,预测出枳实栀子豉汤治疗抑郁症的潜在靶点52个,关键靶点筛选出ERK、CREB、BDNF作为验证通路。GO和KEGG分析结果显示,枳实栀子豉汤治疗抑郁症涉及FoxO信号通路、MAPK信号通路、催乳素信号通路、雌激素信号通路、ErbB信号通路、GnRH信号通路、鞘脂信号通路等多个信号通路。实验动物行为学实验结果显示,与正常组比较,模型组糖水偏好率下降,游泳不动时间上升,旷场实验的水平得分和垂直得分均降低(P<0.01)。与模型组比较,低、中剂量组糖水偏好率上升(P<0.05);与模型组比较,中、高剂量组游泳不动时间减少(P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量组垂直得分升高(P<0.05);与模型组比较,低、中剂量组水平得分升高(P<0.01)。蛋白免疫印迹法结果显示,与正常组比较,模型组大鼠海马p-ERK1/2、p-CREB和BDNF蛋白表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,低、中、高剂量组p-CREB蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,低、中剂量组BDNF蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论枳实栀子豉汤可以改善大鼠抑郁行为,具有治疗抑郁症的作用。其发挥抗抑郁作用的机制与ERK、CREB、BDNF有关。

关键词： 金银花   质量标志物   绿原酸   当药苷   断氧马钱子苷   芦丁   (Z)-二聚断马钱苷烯醛   异绿原酸B   异绿原酸C   α-亚麻酸甲酯   正己醛   (E,E)-2,4-癸二烯醛   网络药理学  

摘要： 目的基于颜色-特征成分关联分析及网络药理学探讨金银花Lonicerae Japonicae Flos中潜在的质量标志物(quality markers,Q-Marker)。方法收集山东、河南和河北3个产地共30批金银花样品,建立金银花HPLC特征图谱方法,得到金银花中的非挥发性特征成分,将其与实验室前期得到的含量较高、具有产地特异性的挥发性成分相结合,作为金银花潜在的Q-Marker候选物;采用色彩分析仪测定金银花的颜色与Q-Marker进行相关性分析,筛选出与颜色相关的成分;结合网络药理学方法,从金银花的适应证和功效2个层面对Q-Marker候选物的药理活性进行预测,进一步确定潜在Q-Marker。结果建立了金银花非挥发性成分HPLC特征图谱,指认了9个特征峰,结合实验室前期对挥发性成分研究结果,最终从金银花中得到了16种特征性成分;相关性分析结果表明,与金银花颜色具有显著相关性的成分有10个,包括绿原酸、当药苷、断氧马钱子苷、芦丁、(Z)-二聚断马钱苷烯醛、异绿原酸B、异绿原酸C、α-亚麻酸甲酯、正己醛、(E,E)-2,4-癸二烯醛;网络药理学研究得到11种与疾病和药效关联的Q-Marker,分别为当药苷、断氧马钱子苷、芦丁、(Z)-二聚断马钱苷烯醛、异绿原酸B、异绿原酸A、芳樟醇、肉豆蔻酸、α-亚麻酸甲酯、α-橙花醇、月桂醛。通路富集分析结果显示,这些成分主要通过丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)、丝裂原活化蛋白激酶激酶1(recombinant mitogen activated protein kinase kinase 1,MAP2K1)、丝裂原活化蛋白激酶14(mitogen-activated protein kinase 14,MAPK14)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等62个关键靶点作用于细胞凋亡(apoptosis)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、松弛素(relaxin)、C型凝集素(C-type lectin receptor)、白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)、结合免疫球蛋白E的Fc受体(Fc epsilon RI)、T细胞抗原受体(T cell receptor)等多种信号通路。将颜色和药理活性成分取交集,最终得到6种与颜色关联的Q-Marker,包括当药苷、断氧马钱子苷、芦丁、异绿原酸B、(Z)-二聚断马钱苷烯醛、α-亚麻酸甲酯。因此,为提高金银花的质量标准,可以考虑在《中国药典》标准基础上,将芦丁、异绿原酸B、α-亚麻酸甲酯、芳樟醇和肉豆蔻酸纳入金银花的质量评价体系。结论从理论层面出发,筛选出能够体现其质量的Q-Marker,为全面控制金银花的质量提供依据,为进一步研究金银花的活性物质及其作用机制提供参考。

关键词： 环丙沙星   主动脉夹层   主动脉平滑肌细胞   网络药理学   分子对接技术   胱天蛋白酶3   基质金属蛋白酶9   白细胞介素-6   肿瘤坏死因子  

摘要： 目的 通过网络药理学及分子对接技术,筛选环丙沙星调控主动脉夹层发生发展的关键靶点基因,并通过动物及细胞实验进一步探究其潜在致病机制。方法 通过TargetPrediction、PharmMapper、GeneCards、CTD数据库分别筛选环丙沙星及主动脉夹层的相关靶点,二者取交集后得到环丙沙星调控主动脉夹层的潜在靶点;使用基因与蛋白质相互作用检索数据库(STRING)构建蛋白质相互作用(PPI)网络分析潜在靶点间的关联。通过对潜在靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析和基因本体(GO)功能富集分析,构建“药物–靶点–通路–疾病”网络。利用Cytoscape软件及蛋白质复合物聚类算法(MCODE)等插件进一步筛选出关键靶点,通过AutoDock vina和PyMol软件把环丙沙星化学结构与筛选出的关键靶点进行分子对接及可视化呈现。最后结合动物模型构建、苏木精–伊红(HE)染色法、细胞增殖和毒性检测实验、体内外实时荧光定量反应(RT-qPCR)实验及蛋白质免疫印迹(Western blotting),检测小鼠主动脉组织及人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)关键靶点基因表达。结果 本研究筛选出515个环丙沙星相关靶点,9 004个主动脉夹层相关靶点,并得到412个环丙沙星介导主动脉夹层的潜在靶点。KEGG通路富集分析结果显示,主要富集于血脂与动脉粥样硬化、白细胞介素(IL)-17信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路等。GO功能富集分析结果显示,细胞定位(CC)主要富集于膜筏、膜微区等;分子功能(MF)主要富集于受体结合、异生物跨膜转运蛋白活性等;生物学过程(BP)主要富集于对脂多糖的反应、对细菌来源分子的反应等。STRING及Cytoscape分析构建PPI网络图及关键子模块,获得了15个关键靶点,分别为B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、转录因子AP-1(JUN)、CD44、胱天蛋白酶3(CASP3)、Toll样受体4(TLR4)、γ干扰素(IFNG)、肿瘤蛋白P53(TP53)、蛋白激酶B1(Akt1)、白蛋白(ALB)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-1β、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、肿瘤坏死因子(TNF)。分子对接结果显示,环丙沙星与MMP9、ALB、GAPDH、Akt1、TP53、CASP3、IL-1β的对接模式较好。体内实验表明,相较于模型组,模型+环丙沙星组在成膜率和死亡率上均增加,管壁弹性结构破坏也更加严重;促凋亡基因及促炎基因的m RNA表达水平及蛋白表达水平均增加。体外实验发现,相较于对照组,不同浓度环丙沙星刺激HASMCs细胞后,MMP9、IL-6、CASP3、JUN、IL-1β、TP53和TLR4表达水平明显上调,Akt1表达水平明显下调。结论 环丙沙星是介导主动脉夹层发生发展的重要因素之一,可能通过刺激炎症因子表达及VASMCs凋亡发挥调控作用。