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关键词： 苗药抑癌汤   网络药理学   分子对接   Wnt/β-catenin信号通路   小细胞肺癌(SCLC)   NCIH446   细胞  

摘要： 目的运用网络药理学及分子对接技术挖掘并预测苗药抑癌汤(Miao-Yi-Ai-Tang,MYAT)治疗小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)的作用靶点及相关信号通路,并通过细胞及动物实验验证其作用机制,为基础实验及临床应用提供理论依据。方法从TCMSP数据库获取MYAT有效成分,并结合PubMed、Swiss Target Prediction及Uniprot数据库获取潜在靶点;通过DrugBank、Genecards、OMIM、TTD数据库收集SCLC相关基因,通过Venny 2.1平台获取MYAT和SCLC的交集基因后导入STRING数据库,构建蛋白质相互作用网络(Protein-protein interaction,PPI),运用Cytoscape 3.9.1软件进行可视化分析,利用Metascape数据库进行GO富集分析及KEGG通路分析,预测MYAT治疗SCLC的直接作用靶点及信号通路;使用AutoDock Tools 1.5.7软件进行分子对接验证两者之间的紧密联系。通过细胞学实验验证,培养细胞加入MYAT处理并使用qPCR检测β-catenin、AXIN、c-myc的表达,Western blot检测细胞中β-catenin的表达;动物实验建立肺癌NCI-H446皮下移植瘤模型,观察MYAT对肿瘤生长的影响。结果共获得MYAT有效成分65个,SCLC基因1368个,MYAT与SCLC交集基因260个,富集分析显示与癌症通路、PD-L1/PD-1通路、NF-κB通路、Wnt等信号通路有关。分子对接验证结果显示,其有效活性成分与核心靶点蛋白的结合能均<0 kJ·mol-1,说明蛋白可与活性成分自发结合且稳定性较好。细胞实验显示MYAT组β-catenin、c-myc及AXIN mRNA表达量均显著下调(P<0.05)。动物实验显示:MYAT能明显抑制肿瘤在体内的生长。结论苗药抑癌汤可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制小细胞肺癌增殖。

关键词： 心房颤动   搜风化痰方   网络药理学   分子对接   作用机制  

摘要： 目的:通过网络药理学预测搜风化痰方治疗心房颤动的作用靶点及信号通路,进一步探讨其治疗心房颤动的潜在作用机制。方法:用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选搜风化痰中药复方的活性成分并预测其作用靶点,构建活性成分-预测靶点网络。通过OMIM、TTD、Gene Cards检索心房颤动的潜在靶点,采用STRING 11.0获取心房颤动靶点蛋白质相互作用,通过Cyto Scape 3.9.1软件对搜集到的数据进行可视化分析,进而构建心房颤动靶点的蛋白质-蛋白质相互作用网络。通过Venny将搜风化痰中药复方预测靶点与心房颤动靶点进行合并,得到搜风化痰中药复方治疗心房颤动的潜在靶点,运用DAVID数据库对搜风化痰方治疗心房颤动的潜在靶点进行生物功能及信号通路富集分析。通过微生信平台进行数据可视化分析,Cyto Scape3.9.1软件构建搜风化痰方治疗心房颤动的活性成分-潜在靶点-信号通路网络。结果:预测出搜风化痰中药复方治疗心房颤动的潜在靶点25个,中药复方可通过糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体信号通路、松弛素信号通路、白细胞介素-17信号通路等发挥治疗心房颤动的作用。结论:搜风化痰中药复方基于多成分、多靶点、多通路治疗心房颤动。

关键词： 网络药理学   癌因性疲乏   芪术增力方   肺复康方   蛋白聚糖  

摘要： 目的观察芪术增力方对裸鼠癌因性疲乏的影响,探讨其可能的作用机制。方法在TCMSP平台搜索芪术增力方活性成分,通过Uniprot数据库转化为相关靶点;在Gene Cards数据库、OMIM数据库、DrugBank数据库搜索癌因性疲乏相关靶点,通过Jvenn平台绘制药物、疾病靶点交集图,String平台制作蛋白质互作网络(protein-protein interaction networks,PPI),Metascape平台进行GO和KEGG富集分析,选取癌症蛋白聚糖(proteoglycans in cancer)信号通路进行研究。将25只裸鼠随机分为空白组、模型组、中药组、化疗组(顺铂)及地塞米松组。构建癌因性疲乏模型,干预3周后,ELISA法检测裸鼠瘤体内磷脂酰肌酶聚糖受体(glypican,GPC)1、GPC5、多配体蛋白聚糖(syndecan,SDC)2、丝甘蛋白聚糖(serglycin gene,SRGN)表达;观察光镜下各组裸鼠瘤体组织的病理形态。结果与模型组比较,中药组及化疗组的GPC1水平显著降低(P<0.01);中药组SDC2水平降低(P<0.05);中药组、化疗组、地塞米松组瘤体内SRGN水平均降低(P<0.05)。结论芪术增力方通过降低裸鼠瘤体内GPC1、SDC2、SRGN水平达到缓解疲乏的效果,其机制可能与抑制肿瘤生长、转移有关。

关键词： 白鲜皮提取物   网络药理学   免疫调节   小鼠  

摘要： 本试验旨在探究白鲜皮的免疫调节能力及其机制。通过TCMSP数据库筛选出11个白鲜皮活性成分,利用GeneCard数据库和OMIM数据库预测到318个相关联的靶点基因,通过对药物靶点的筛选,获得63个疾病与药物共同的靶点。通过Cytoscape软件构建药物-活性成分-靶点网络。使用Perl计算机程序语言对GO功能富集结果进行筛选和KEGG通路富集分析。通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,用1.3、2.6、5.2 g/kg BW(按生药量计)的白鲜皮提取物灌胃免疫抑制小鼠2周后检测小鼠体重、免疫器官指数、血清细胞因子含量、血常规指标。结果显示:白鲜皮中的黄芩素、β-谷甾醇、木犀草素、白鲜明碱、前茵芋碱、槲皮素等化合物通过调节AKT1、IL6、IL1B、JUN、PTGS2、VEGFA等重要靶点,参与调节白细胞介素-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路,进而起到免疫调节的效果。小鼠免疫抑制试验发现,相比模型组,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物对小鼠的体重没有产生显著影响(P>0.05),但极显著增加了小鼠的肝脏指数和脾脏指数(P<0.01);此外,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物极显著提高了小鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、免疫球蛋白A(IgA)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(P<0.01)。本研究展现了白鲜皮免疫调节多成分、多靶点作用的特点,可为白鲜皮在畜禽健康养殖中的应用提供科学依据。

关键词： 水合橙皮内酯   枳壳   增强免疫   斑马鱼模型   网络药理学  

摘要： 目的 基于模式生物斑马鱼结合网络药理学,研究枳壳的活性成分水合橙皮内酯增强免疫作用及作用机制。方法建立2种斑马鱼免疫低下模型:以雷帕霉素建立尾部中性粒细胞数目减少模型,以酒石酸长春瑞滨建立静脉血管中巨噬细胞荧光强度减弱模型,检测水合橙皮内酯(10、20、50、100、200μg·mL^(-1))各给药组斑马鱼尾部中性粒细胞数目、斑马鱼尾部静脉血管中巨噬细胞荧光强度,计算中性粒细胞增长率和巨噬细胞改善率。基于网络药理学预测水合橙皮内酯增强免疫作用的机制,使用Pharm Mapper、中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)进行水合橙皮内酯靶点筛选,运用Gene Cards数据库和OMIM数据库检索增强免疫相关靶点,运用Venny2.1将上述两组靶点取交集后导入String数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析,进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,在Cytoscape3.9.1软件中构建水合橙皮内酯的增强靶点PPI网络,并以节点度值的中位数筛选关键靶点。结果 与模型组相比,水合橙皮内酯可显著增加斑马鱼尾部中性粒细胞数目(P<0.01、0.001)、静脉血管中巨噬细胞荧光强度(P<0.05),证明水合橙皮内酯具有抗雷帕霉素、酒石酸长春瑞滨引起的免疫力低下作用,呈剂量相关性。水合橙皮内酯增强免疫的作用机制可能与AKT1、EGFR、SRC、MMP9、ESR1等关键靶点及PI3K-Akt、Rap1、AGE-RAGE等信号通路有关。结论 水合橙皮内酯具有增强免疫作用,可能通过调控PI3K-Akt、Rap1、AGE-RAGE等信号通路发挥作用。

关键词： 网络药理学   通关藤口服液   胃癌   分子对接   EGFR/PI3K/AKT/mTOR信号通路  

摘要： 目的利用网络药理学方法、分子对接及体外细胞实验探究通关藤(marsdenia tenacissima,MT)口服液抑制胃癌(gastric cancer,GC)增殖的潜在作用机制。方法通过搜索文献、检索TCMSP、Swiss Target Prediction数据库完成MT化学成分、靶点基因的收集;采用Gene Cards数据库获取疾病相关靶点;利用STRING平台和Cytoscape软件构建交集靶点的蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI);采用Metascape网络平台进行GO和KEGG信号通路分析;运用Auto Dock对部分活性成分与潜在靶点进行分子对接验证;采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测MT口服液对GC细胞增殖的抑制作用,分别与厄洛替尼和阿帕替尼联用的协同作用、流式细胞术检测MT口服液诱导GC细胞凋亡及对胃癌细胞周期的影响;采用RT-qPCR法检测MT口服液对GC细胞周期、凋亡相关基因表达的影响;采用Western blot法验证网络药理学和分子对接筛选的靶点。结果共得到MT主要活性成分17个,胃癌关键靶点1880个,主要信号通路167条。体外实验结果表明,40~200 mg/m L的MT口服液可有效抑制GC细胞增殖(P<0.01),与厄洛替尼和与阿帕替尼联用时,具有协同效应。40~160 mg/m L的MT口服液可诱导胃癌细胞凋亡(P<0.01),阻滞细胞周期G0/G1期(P<0.01)。RT-qPCR结果显示,通关藤口服液可以上调B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,BAX)的表达量,下调Bcl-2、细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependent kinase,CDK)4、CDK6(P<0.05)的表达量。Western blot结果显示MT口服液,抑制磷酸化-表皮生长因子受体(phosphorylated-epidermal growth factor receptor,p-EGFR)、磷酸化-磷脂酰肌醇-3激酶(phosphorylated-phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化AKT丝氨酸/苏氨酸激酶(p-AKT)、磷酸化-雷帕霉素激酶的机制靶点(phosphorylated-mechanistic target of rapamycin kinase,p-mTOR)的表达水平,降低p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT1、p-mTOR/m TOR比值;同时上调BAX、肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,P53)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A/P21),下调Bcl-2、CDK4、CDK6(P<0.05)水平。结论MT口服液可有效抑制胃癌细胞的增殖,阻滞细胞周期并诱导胃癌细胞凋亡,并提高小分子靶向药物厄洛替尼和阿帕替尼治疗胃癌的敏感性。其机制与经调控PI3K/AKT/m TOR信号通路上调BAX、P53、P21,下调Bcl-2、CDK4、CDK6的表达,并抑制EGFR信号通路有关,实验结果验证了网络药理学和分子对接的结果。

关键词： 青钱柳   网络药理学   分子对接   镇痛  

摘要： 目的探明青钱柳镇痛作用机制,为青钱柳临床应用和药物开发提供科学指引。方法通过中药网络药理学的研究方法探讨青钱柳镇痛作用机制。利用分子对接验证核心靶点与活性化合物的结合能力。用纯化水对青钱柳叶进行恒温回流提取。用ELISA试剂盒检测青钱柳叶水提物降低小鼠疼痛指标以及对核心靶点的抑制情况。结果青钱柳镇痛的核心靶点为IL-6、COX-2和MMP-9。核心靶点与活性化合物均能较好结合。青钱柳叶水提物能较好地降低小鼠疼痛指标和抑制核心靶点IL-6、COX-2以及MMP-9。结论青钱柳的主要镇痛机制可能通过抑制核心靶点IL-6、COX-2和MMP-9,从而达到镇痛的效果。

关键词： 大黄-桃仁药对   血瘀证   活血化瘀   分子机制   中药功效物质  

摘要： 本研究整合功效实验、网络药理学和HPLC探讨大黄-桃仁药对(Rhei Radix et Rhizoma-Persicae Semen combination,RRR-PS)配伍发挥活血化瘀作用的功效物质群及分子作用机制。建立大鼠血瘀证模型,进行血液流变指标和凝血四项综合评价,结果显示,与模型组相比,RRR-PS组大鼠的全血黏度、血沉、红细胞聚集指数等指标均明显回调(P<0.01)。网络药理学发现RRR-PS通过作用于钙调蛋白1(CALM1)、一氧化氮合酶2(NOS2)、糖皮质激素受体(NR3C1)等靶点,调控血小板活化、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、血管内皮生长因子(VEGF)等信号通路发挥活血化瘀的功效,并发现关键成分:番泻苷B、儿茶素、大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、没食子酸。运用HPLC探究关键成分的溶出率,结果发现RRR-PS配伍后,儿茶素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚4种主要功效物质含量均显著提高(P<0.01)。综上所述,RRR-PS活血化瘀功效显著,其作用机制与促进血管生成、抗凝血、抗血栓、抗炎有关;功效发挥与RRR-PS配伍后,溶剂系统改变,儿茶素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚大量溶出相关。研究结果可进一步为后续RRR-PS配伍活血化瘀功效物质及作用机制研究提供参考。动物实验已获得陕西中医药大学实验动物委员会批准(批准号:SUCMDL20210309002)。

关键词： 清肝颗粒   超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱   定性分析   裂解途径   网络药理学   分子对接   黄疸性肝炎   多成分含量测定  

摘要： 目的:阐明清肝颗粒治疗黄疸性肝炎的物质基础,建立科学的质量控制方法。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术对清肝颗粒的活性成分进行表征分析;以清肝颗粒中鉴定出的活性成分为目标对象,进行网络药理学和分子对接研析,并建立多成分含量测定方法。结果:共鉴定出134个成分,其中黄酮类50个、糖苷类8个、苯丙素类17个、三萜类11个、萜类6个、氨基酸类11个、有机酸类9个、脂肪酸类7个、生物碱类8个、挥发油类5个、醌类1个,并解析了黄酮类、萜类、有机酸类、生物碱类以及糖苷类代表性化合物的裂解规律。通过网络药理学分析筛选出8个核心靶点。预测了主要活性成分为异甘草素、腺苷、甘草素、鸟苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸等。其次,依据可测性、特征性以及活性相关性的原则,建立了3,4-二咖啡酰奎宁酸、(R,S)-告依春、甘草素、4,5-二咖啡酰奎宁酸和甘草酸铵等5个潜在活性成分的含量测定方法。结论:筛选出了清肝颗粒治疗黄疸性肝炎的主要药效活性成分,并展开定量研究,可为清肝颗粒质量控制水平的提高提供了依据。