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关键词： 整合药理学   实验验证   健脾除痰解毒方   肺癌   TP53   代谢  

摘要： 基于整合药理学和实验验证探讨健脾除痰解毒方(Jianpi Chutan Jiedu Decoction,JCJD)干预肺癌的作用机制。采用中医药整合药理学研究平台(Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional Chinese Medicine,TCMIP)V2.0,检索并获取健脾除痰解毒方靶标及功能信息,以及肺癌疾病靶标及功能信息,借助中医关联网络挖掘平台构建“疾病-方剂”关联网络,并通过网络拓扑特征计算、自定义多维关联网络可视化(方剂-中药材-核心靶标-通路-疾病)以及基因本体(GO)功能和依托Reactome数据库的Pathway信息进行富集分析,发现健脾除痰解毒方干预肺癌的关键网络靶标及其作用机制。最后通过动物实验进一步验证整合药理学结果。结果共获得健脾除痰解毒方干预肺癌的核心靶标53个;GO富集分析得到生物过程有20种条目,细胞组分有11种条目,分子功能有20种条目;Reactome Pathway富集分析得到11个条目,主要涉及呼吸电子传递、TP53调节代谢基因、细胞内受体的SUMO化、白细胞介素(IL)-4和IL-13通路等信号通路。动物实验结果显示与模型组比较,联合组肿瘤组织中乳酸含量明显下降(P<0.05),联合组可明显上调肿瘤组织中磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)蛋白平均光密度值(P<0.05),降低丙酮酸激酶M2(PKM2)和己糖激酶2(HK2)蛋白平均光密度值(P<0.05);与模型组比较,联合组可明显上调肿瘤组织中肿瘤抑制蛋白(P53)、PTEN mRNA及蛋白表达(P<0.01,P<0.05),降低肿瘤组织中TP53诱导的糖酵解与凋亡调控因子(TIGAR)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、PKM2、HK2 mRNA及蛋白表达(P<0.01)。综上,健脾除痰解毒方通过TP53调节代谢基因来下调葡萄糖代谢,从而抑制肺癌增殖。

关键词： e教学平台   药理学   课程建设   混合教学  

摘要： “药理学”作为一门医学“桥梁”学科,在医学课程中有着重要的地位和作用。因此,对药理学科教学课程体系进一步的建设,对提高“药理学”教学质量及培养学生自主学习、创新能力具有重要意义。从教学团队组建、课程建设思路、课程建设流程、考核评价设计等几个方面介绍课程体系建设,并在“药理学”课程体系下进行线上线下的混合教学实践探究,学生期末成绩与传统教学模式相比明显提高,教学方式也得到学生好评,该教学模式可更好地指导与完善“药理学”课程建设。

关键词： 灯盏生脉胶囊   冠心病   网络药理学   分子对接   作用机制  

摘要： 目的 基于网络药理学结合分子对接技术探讨灯盏生脉胶囊(DZSM)治疗冠心病(CHD)的潜在作用靶点及机制。方法 采用TCMSP和ETCM数据库检索DZSM的化学成分;采用Swiss ADME数据库进行活性成分筛选,Swiss Target Prediction数据库获取活性成分的潜在靶点。检索GeneCards和DisGeNET数据库获取CHD靶点,构建“DZSM-活性成分-CHD靶点”网络。对关键活性成分和核心靶点进行分子对接,验证结合特性。于DAVID数据库进行基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析。采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠巨噬细胞系(RAW264.7细胞)模型体外验证野黄芩苷对CHD的治疗作用。采用Griess反应测定细胞上清液中一氧化氮(NO)生成量。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)表达水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测AKT蛋白表达和磷酸化水平。结果 共获得DZSM的56个活性化合物,通过作用于136个靶点调控CHD进展。其中山奈酚、槲皮素、木犀草素、芹菜素、野黄芩素、6-羟基山奈酚、野黄芩苷、对壬基酚、麦冬皂苷D和人参皂苷Rb1能够调控共113个CHD靶点。AKT1、SRC、PPARG、EGFR、ESR1、PTGS2、SIRT1、MAPK1、MMP9和PPARA基因为DZSM治疗CHD的核心靶点。分子对接结果显示,关键活性成分与核心靶点具有良好的结合特性。体外实验结果表明,野黄芩苷可减少巨噬细胞一氧化氮生成,增加AKT mRNA、AKT蛋白表达和磷酸化水平(P<0.05)。KEGG富集分析显示,DZSM主要通过调控癌症通路、内分泌抵抗、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化、脂质与动脉粥样硬化、松弛素信号通路等途径治疗CHD。结论 DZSM通过多成分、多靶点、多途径发挥治疗CHD的作用。

关键词： 茯苓   5-氟尿嘧啶   化疗性肠黏膜炎   网络药理学  

摘要： 目的观察茯苓对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)诱导的化疗性肠黏膜炎(chemotherapeutics-induced intestinal mucositis,CIM)模型小鼠的治疗作用,并结合网络药理学探讨其作用机制。方法通过TCMSP数据库获得茯苓的潜在成分与核心靶点;通过GeneCards数据库收集CIM相关基因靶点;使用Metascape数据库进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析。小鼠连续5 d腹腔注射5-FU诱导CIM模型;小鼠给予茯苓预防治疗5 d,边造模边给药治疗5 d,造模结束后治疗3 d,记录动物基本体征指标;苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察回肠黏膜组织病理损伤情况;免疫荧光染色观察回肠组织肠黏膜核因子(nuclear factor,NF)-κB p65、环氧化酶(cyclooxygenase,COX)-2与闭合蛋白(Occludin)的阳性表达情况。结果网络药理学结果显示,茯苓经筛选获得活性成分14个,茯苓治疗CIM的核心靶点182个;茯苓影响CIM作用机制可能是通过环磷酸腺苷(cyclic-AMP dependent protein kinase A,cAMP)信号通路、Toll样受体(toll-like receptor,TLR)信号通路等途径;动物实验结果显示,与模型组比较,柳氮磺胺吡啶组和茯苓各剂量组小鼠体质量和食物消耗量上升,结肠长度和脾脏指数增加(P<0.05);组织水平上,柳氮磺胺吡啶组和茯苓各剂量组小鼠的回肠绒毛长度与杯状细胞数增加,柳氮磺胺吡啶组和茯苓中剂量组隐窝深度减小(P<0.05);蛋白表达上,茯苓中、高剂量组和柳氮磺胺吡啶组小鼠回肠NF-κB p65、COX-2表达明显减少,Occludin的表达明显增加(P<0.01)。结论茯苓对5-FU诱导的小鼠CIM有明显的治疗作用,其机制与抑制TLR通路中NF-κB p65、COX-2蛋白表达,增加Occludin表达并提高机体免疫有关。

关键词： 湿疹2号方   儿童特应性皮炎   网络药理学   分子对接   作用机制  

摘要： 目的:运用网络药理学和分子对接研究湿疹2号方治疗儿童特应性皮炎的作用机制。方法:通过中药系统药理数据库与分析平台(TCMSP)获取湿疹2号方药物的活性成分,从SwissTargetPrediction、PubChem数据库中获取活性成分相关靶点,在DisGeNET、GeneCards中检索儿童特应性皮炎疾病有关靶点,二者取交集即为湿疹2号方治疗儿童特应性皮炎的潜在靶点,利用Cytoscape 3.9.1软件构建“复方-活性成分-靶点”网络。将潜在靶点导入STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用网络分析,通过DAVID数据库进行基因本体论(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,利用AutoDock、PyMol进行分子对接及可视化。结果:获得湿疹2号方药物活性成分33个、相关靶点620个、疾病靶点1 493个、潜在靶点208个。主要活性成分:黄芩素、杨芽黄素、芹菜素、紫草素、木犀草素等;核心靶点:SRC酪氨酸激酶(Src Tyrosine Kinase,SRC)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、血管细胞附着分子1(Vascular Cell Adhesion Molecule 1,VCAM1)、丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinase,MAPK)1、MAPK3等;关键通路:辅助性T细胞(T Helper Cell,Th)17细胞分化、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)信号通路、T细胞受体信号通路等。结论:湿疹2号方可能主要通过Th17细胞分化、TNF信号通路、T细胞受体信号通路等发挥治疗儿童特应性皮炎的作用。

关键词： 知母-黄柏药对   盐炙   血清药物化学   2型糖尿病   网络药理学   分子对接   细胞验证  

摘要： 目的基于液质联用技术对生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对水提液灌胃给药后大鼠入血成分分析,结合网络药理学预测盐炙在知母-黄柏药对治疗2型糖尿病的影响,并通过体外实验进行初步验证。方法大鼠连续灌胃给药生知母-生黄柏药对、盐知母-盐黄柏药对水提液2次,中间间隔1 h,末次给药60 min后腹主动脉取血,用甲醇沉淀蛋白法处理后复溶,采用色谱柱Shim-pack GIST C 18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相A相为0.1%甲酸水,B相为0.1%甲酸-乙腈;梯度洗脱,正、负离子全扫描模式,质量扫描范围m/z 100~1500。结合数据库二级谱图及文献,分析鉴定生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对的入血成分。检索2型糖尿病疾病靶点,对入血成分和疾病的交集靶点进行蛋白质互作网络分析、GO、KEGG通路富集分析,构建“入血成分-靶点”网络图,运用AutoDock软件对筛选出的核心成分和核心靶点进行分子对接验证。验证实验以HepG2细胞为实验对象,胰岛素联合高糖诱导胰岛素抵抗模型,CCK8法检验盐炙前后知母-黄柏药对对细胞增殖影响,Western blot检测PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果生知母-生黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出15种原型成分,1个芒果苷代谢成分。盐知母-盐黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出17个原型成分,1个芒果苷代谢成分。盐炙后入血成分中芒果苷、小檗碱、3-异丁基戊二酸等成分含量较生品高。KEGG和GO结果显示,知母-黄柏药对治疗2型糖尿病可能与RNA聚合酶的转录调控、炎症反应、AGE-RAGE、PI3K-AKT、胰岛素抵抗等通路有关。细胞实验表明盐炙前后知母-黄柏药对可以上调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、GLUT4蛋白表达,且盐炙组效果优于生品组。结论初步阐释了知母-黄柏药对盐炙前后入血成分,阿魏酸、小檗碱、小檗红碱、芒果苷与mTOR、SIRT1、EGFR、PPARA等可能是知母-黄柏药对盐炙后增强2型糖尿病治疗效果的主要成分和靶点,其机制可能是增强了PI3K-AKT等相关通路的作用,为知母-黄柏药对盐炙前后药效物质基础研究及临床应用提供重要参考。

关键词： 特发性肺间质纤维化   网络药理学   信号通路   分子对接   冬虫夏草   作用机制  

摘要： 目的:运用网络药理学和分子对接技术探究冬虫夏草治疗特发性肺间质纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)筛选出冬虫夏草的主要活性成分及其对应靶点;通过人类基因数据库(the human gene database,GeneCards)、在线人类孟德尔遗传数据库(online mendelian inheritance in man,OMIM)、DrugBank数据库检索获得IPF疾病相关靶点,取二者交集靶点作为冬虫夏草治疗IPF的关键作用靶点;将交集靶点上传至STRING数据库,构建冬虫夏草活性成分与IPF疾病的共同靶点蛋白-蛋白互作网络(protein-protein interactions,PPI),根据度值筛选出核心靶点;将交集靶点基因导入DAVID分析平台,进行基因本体(gene ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。结果:共获得冬虫夏草活性成分7个,作用于IPF的关键靶点84个;关键活性成分有乙酸亚油酯、花生四烯酸、胆固醇、β-谷甾醇,核心靶点有J原癌基因、过氧化物酶体增殖物激活受体γ、丝裂原活化蛋白激酶14等,GO和KEGG富集分析显示主要通路有TNF、VEGF、p53、cAMP、MARK、鞘脂等信号通路,涉及癌症、细胞凋亡、炎症反应等多个生物进程。冬虫夏草活性成分与靶点蛋白可以形成稳定的复合物。结论:冬虫夏草对IPF的治疗作用具有多成分、多靶点、多通路的特点。

关键词： 少腹逐瘀汤   超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱   化学成分   宫颈癌   网络药理学  

摘要： 采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)技术,结合网络药理学和分子对接,对少腹逐瘀汤发挥抗宫颈癌作用的重要成分、靶点和通路进行预测分析,并通过细胞实验初步探究其作用机制。经鉴定发现苯丙素类、黄酮类、萜类、生物碱类、有机酸类、挥发油类、苯酞类、香豆素类、苯醛类、氨基酸类、酚类和其他类等共89种化合物,网络药理学和分子对接深入挖掘得到少腹逐瘀汤抗宫颈癌的7个重要成分、8个核心靶点和10条宫颈癌相关信号通路。细胞实验表明,给药组HeLa细胞与空白对照组相比,生存率逐渐降低,细胞凋亡率逐步提高,呈浓度依赖性(P<0.05)。少腹逐瘀汤可以提高Bax、Cyto c、Caspase 9和Caspase 3表达水平,降低PI3K、AKT和Bcl-2表达水平。少腹逐瘀汤可能通过槲皮素、芍药苷、黄芩素、山奈酚、沙立朴吩、丁香酚和鞣花酸等成分作用于TP53、AKT1和EGFR等靶点发挥抗宫颈癌作用,其机制与PI3K/AKT和Bcl-2家族蛋白信号通路的调控密切相关,充分体现了多成分、多靶点和多通路的特点。

关键词： 肺癌   网络药理学   分子对接   作用机制   蟾酥  

摘要： 目的:采用网络药理学及分子对接技术探索蟾酥治疗肺癌的分子作用机制。方法:通过中药与化学成分数据库、BATMAN、SwissADME、SwissTargetPrediction数据库获取并筛选蟾酥的活性成分及作用靶点;通过人类基因数据库(the human gene database,GeneCards)、在线人类孟德尔遗传数据库(online mendelian inheritance in man,OMIM)、药物靶标数据库(therapeutic targetdatabase,TTD)获取肺癌主要靶点,利用STRING平台构建共同靶点蛋白-蛋白互作网络(protein-protein interactions,PPI);运用Cytoscape 3.7.1软件构建蟾酥活性成分-肺癌-靶点交集网络;通过R语言软件对共同靶点进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析;通过AutoDock Tools 1.5.6、AutoDock vina 1.1.2进行分子对接验证。结果:共筛选出蟾酥有效活性成分19个,蟾酥作用于肺癌的靶点94个,PPI网络显示表皮生长因子受体、丝裂原活化蛋白激酶3、丝裂原活化蛋白激酶1、白细胞介素6、类固醇受体辅激活因子等为核心靶点,主要涉及肽基-酪氨酸磷酸化及修饰、丝氨酸磷酸化及修饰等生物过程;蟾酥作用于肺癌的生物学通路主要富集在PI3K/Akt、癌症蛋白聚糖、癌症MicroRNAs等信号通路;分子对接结果证明蟾酥大部分有效活性成分与核心蛋白靶点有较好的结合活性。结论:蟾酥可通过多成分、多靶点、多通路治疗肺癌。

关键词： 绝经后骨质疏松症   逍遥丸   网络药理学   信号通路   疏肝解郁  

摘要： 目的:基于网络药理学并通过动物实验研究逍遥丸对去卵巢骨质疏松症中小鼠骨结构形态的治疗作用,以及对AGES/RAGE信号转导途径的改变和分子机制。方法:通过TCMSP等数据库搜索逍遥丸药物成分及其成分相关靶点;以“osteoporosis”为关键词,在GeneCards等数据库搜索骨质疏松症相关的靶点;制作韦恩图,获取交集靶点;最后通过DAVID数据库,对药物-疾病交集靶点进行GO与KEGG富集分析并将富集结果可视化。其次,建立小鼠骨质疏松模型,通过CT扫描,HE染色以及免疫组化等检测逍遥丸对成骨分化的影响,并验证网络药理学信号通路预测结果。结果:逍遥丸治疗骨质疏松症的核心活性成分有8种,分别为柴胡、当归、白芍、炒白术、茯苓、炙甘草、薄荷、生姜,合并去重后共得到225个靶点基因。其关键靶点主要参与调控AGEs/RAGE信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路等。在小鼠骨质疏松模型中,逍遥丸能有效提高ALP、COL-1成骨转录因子表达(P<0.05),同时下调AGEs/RAGE信号通路关键蛋白rage、IL-6的表达(P<0.05)。结论:逍遥丸有效改善去卵巢骨质疏松症小鼠骨形态学结构,具有抗去卵巢骨质疏松作用,其机制可能与抑制AGES/RAGE信号通路,提高成骨标志基因ALP、COL-1有关。