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关键词： 糖尿病肾病   三七总皂苷   自噬   网络药理学   分子对接   PI3K/Akt/mTOR   实验验证   小鼠  

摘要： 目的通过网络药理学、分子对接结合动物实验的方法探讨三七总皂苷(PNS)调控自噬改善糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏的作用机制。方法通过文献检索得到PNS的主要活性成分,利用PubChem、PharmMapper数据库获取对应靶点;通过GeneCards、OMIM数据库收集DN疾病相关靶点,取两者交集。通过Cytoscape 3.9.1软件构建“中药-活性成分-靶点”网络,STRING数据库构建蛋白互作(PPI)网络并筛选核心靶点;采用DAVID平台对交集靶点进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;使用AutoDock Vina软件对PNS主要活性成分和关键靶点进行分子对接。将24只8周龄雄性db/db小鼠随机分成模型组、PNS组、厄贝沙坦组,每组8只;另取8只同周龄雄性db/m小鼠作为正常组。每天灌胃给药1次,连续8周。观察各组小鼠一般情况及记录体质量和血糖变化;采用考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白(24 h-UTP);果糖胺法测定糖化血清蛋白(GSP);GPO-PAP法测定总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG);肌氨酸氧化酶法检测血肌酐(Scr);脲酶法检测尿素氮(BUN);苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾脏病理变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测小鼠肾组织泛素结合蛋白(P62)和微管相关蛋白轻链3(LC3)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肾组织P62、LC3及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及磷酸化蛋白(p-Akt、p-PI3K、p-mTOR)表达。结果PNS的主要活性成分为三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1。网络药理学分析显示,PNS活性成分对应靶点341个,DN靶点1534个,PNS与DN交集靶点113个。筛选出PNS治疗DN的关键成分有人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1及核心靶点AKT1、ALB、MMP9和mTOR等,相关的信号通路涉及PI3K/Akt、Ras、MAPK、FoxO等。分子对接显示PNS关键成分人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1与核心靶点AKT1、MMP9、mTOR对接活性良好。动物实验验证结果显示,与正常组比较,模型组小鼠一般状态较差,体质量及血糖、GSP、TC、TG、Scr、BUN和24 h-UTP水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,PNS组小鼠一般状态改善,体质量及血糖水平明显下降(P<0.01),且GSP、TC、TG、Scr、BUN和24 h-UTP水平均显著降低(P<0.05,P<0.01)。HE染色结果显示各治疗组肾脏病理损伤明显改善。RT-qPCR和Western Blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠肾组织LC3 mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.01),而P62 mRNA表达水平升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR及P62蛋白表达水平亦明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,PNS组及厄贝沙坦组LC3 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),P62 mRNA表达水平明显下降(P<0.05,P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR及P62蛋白表达水平均明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论PNS能够明显改善糖尿病肾病小鼠的肾脏损伤,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进自噬有关。

关键词： 菟丝子-枸杞子药对   早发性卵巢功能不全   化学成分   作用机制   UPLC-Q-TOF-MS   网络药理学  

摘要： 目的探讨菟丝子-枸杞子药对治疗早发性卵巢功能不全的成分及机制。方法采用UPLC-Q-TOF-MS法进行分析,结合质谱信息、对照品比对、参考文献以及UNIFI软件对化合物进行指认。采用网络药理学构建“成分-靶点”网络并富集相关通路,再对关键成分与核心靶点进行分子对接。结果共鉴定出110种成分,包括26种黄酮类、23种生物碱类、15种苯丙素类、31种有机酸类、15种其他类,其中菟丝子和枸杞子共有成分32种,菟丝子独有38种,枸杞子独有40种。成分与疾病交集靶点有629个,核心靶点有10个;药对主要参与丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸蛋白激酶活性、膜筏、多肽反应等过程,通过PI3K-Akt信号通路、神经活性配体-受体相互作用、MAPK信号通路等治疗早发性卵巢功能不全;共有4个关键靶点和5种关键活性成分,药对关键成分与核心靶点展现出较强的结合能力。结论本研究通过UPLC-Q-TOF-MS结合网络药理学对菟丝子-枸杞子药对化学成分进行解析,揭示其可能通过多成分、多靶点、多途径来发挥治疗早发性卵巢功能不全的作用。

关键词： 咳宁颗粒   止咳祛痰   网络药理学   质量标志物  

摘要： 该研究基于药效、血浆药物化学、网络药理学及药代动力学等方法探讨咳宁颗粒止咳祛痰的质量标志物(Q-marker)。通过浓氨水引咳和酚红排泌试验评估咳宁颗粒的止咳、祛痰药效作用。采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS)技术分析鉴定到咳宁颗粒的原型入血成分26个。网络药理学筛选出咳宁颗粒止咳祛痰的11个潜在活性成分,涉及IL6、TLR4、STAT3等40个共同靶点,主要参与PI3K/Akt、HIF-1、EGFR等信号通路。利用药代动力学定量分析了7个原型入血成分。通过有效性、传递性、可测性将壬二酸、咖啡酸、香草醛3个化合物作为咳宁颗粒止咳祛痰的质量标志物。该研究结果对于深入明确咳宁颗粒的药效物质基础、优化质量标准以及推动其临床应用具有重要意义。

关键词： 加速康复外科   围手术期管理   急性疼痛   术后疼痛管理   躯体痛   镇痛药物   大型医院   内脏痛  

摘要： 术后疼痛是手术后发生的急性疼痛,包括躯体痛、炎性痛与内脏痛等,通常持续不超过3~7天,术后疼痛管理是围手术期管理及加速康复外科的关键构成部分。近年来随着临床医学的进步,新的镇痛理念、镇痛药物、镇痛方法不断应用于临床,术后疼痛管理得以大力发展,但其现状仍不理想。2023年我国122家大型医院调查显示术后中重度疼痛的发生率高达48.7%。

关键词： 槲皮素   结直肠癌   网络药理学   分子对接  

摘要： 基于网络药理学、分子对接和体外实验探讨槲皮素通过p53信号通路抗结直肠癌的分子作用机制。借助TCMSP和GeneCards数据库分别获取槲皮素的药物靶点和结直肠癌的疾病靶点,并通过Venn图映射出药物靶点与疾病靶点的共同靶点;借助String数据库及Cytoscape_v3.7.2软件构建PPI网络图,同时进行GO和KEGG富集分析、分子对接及核心靶点的表达量及生存分析;最后通过细胞实验检测细胞的增殖活性、细胞凋亡水平和细胞周期阻滞变化、用药前后核心靶点及p53通路关键蛋白的表达变化。网络药理学结果提示AKT1、TP53为槲皮素抗结直肠癌的核心靶点;GO和KEGG分析筛选出槲皮素主要参与PI3K/Akt、p53信号通路;分子对接表明槲皮素与核心靶点AKT1、TP53具有较强的结合活性,TP53既在结直肠癌组织中高表达,又可影响结肠癌患者的生存预后;细胞实验结果表明槲皮素能抑制HCT-116细胞的增殖,诱导HCT-116细胞发生G 0/G 1期阻滞,促进细胞凋亡。该机制可能调控TP53、AKT1等核心靶点,激活p53信号通路,参与HCT-116细胞的增殖与凋亡,进而起到抗结直肠癌的作用。

关键词： 木犀草素   乳腺炎   网络药理学   分子对接   Janus激酶-转录激活因子信号通路  

摘要： 目的:基于网络药理学与体外验证实验探讨木犀草素防治乳腺炎(Mastitis)的相互作用机理。方法:依托TCMSP、Swiss Target Prediction、Gene Cards等数据库系统对木犀草素与乳腺炎相关的靶点做出预测,在STRING数据库系统中取两者交叉靶点构建蛋白相互作用(PPI)网络系统,并借助于CytosCape3.7.软件系统开展可视化数据分析,检测出核心靶点。使用David数据库经过GO和KEGG富集解析,预测木犀草素防治乳腺炎的功能机理,经过分子对接技术和牛乳腺上皮细胞(BMECS)实验验证。结果:预测发现,有314个木犀草素潜在靶点和186个乳腺炎潜在靶点,两者有16个交叉靶点,涉及ICAM1、ERBB、EGFR、ESR1、IL6、TNF等6个重要核心基础靶点。根据GO的分析结果,涉及生物过程的有负调节的凋亡进程、正调节的RNA聚合酶Ⅱ启动子转录、基因组表现的正调节等,这些都是生物过程的重要组成部分。研究表明,DNA结合是一种特殊的分子机制,它可以影响蛋白质、酶、细胞因子、蛋白激酶、雌激素反应元件以及RNA聚合酶Ⅱ转录因子等多种生物学功能,而且它们之间还可以通过配体调节DNA的激活序列,从而发挥出其独特的作用。细胞外空间、细胞表面、线粒体基质等涉及细胞组分。在KEGG途径中,主要有癌症途径、脂质及动脉粥样硬化信号途径、甲型流感途径、JAK-STAT信号途径、PI3K-AKT信号途径、蛋白聚糖、乳癌、EGFR酪氨酸激酶抑制剂抗药性信号途径等。分子对接结果显示,木犀草素与ICAM1、ERBB2、EGFR、ESR1、IL6、TNF等6个核心靶点均具有良好的结合活性。经过实际应用,我们发现,DMSO的浓度为0.5%时,可以使细胞的生存率提升至95.04%。相比之下,LPS的浓度降至10μg·mL^(-1)时,可以使其生长受限。我们还发现,在24 h的情况下,10μg·mL^(-1)的LPS可以有效地影响BMEC细胞,并使其产生更多的TNF-α。低、中、高剂量木犀草素分别为:1μg·mL^(-1)、10μg·mL^(-1)、20μg·mL^(-1),阳性药物地塞米松浓度0.1μg·mL^(-1)。与LPS模型组相比,木犀草素高、中、低剂量对TNF-α、IL^(-1)β生成均具有显著的抑制作用(P<0.01),且有剂量依赖性。结论:网络药理学结合细胞实验表明木犀草素对乳腺炎有一定的抗炎活性,该作用与其调控JAK-STAT信号通路密切相关。

关键词： 过敏性咳嗽   小儿化痰止咳颗粒   蛋白质组学   网络药理学   作用机制  

摘要： 目的:基于蛋白质组学、网络药理学共同探讨小儿化痰止咳颗粒(XEHT)在治疗过敏性咳嗽(AC)可能涉及的药理作用机制。方法:通过腹腔注射含卵蛋白(OVA)2 mg和氢氧化铝100 mg的混悬液1 mL致敏后,以1%OVA雾化构建豚鼠AC模型,随机分为模型组、XEHT低、中、高剂量组(1、5、20 g·kg^(-1))与孟鲁斯特钠组(1 mg·kg^(-1))每组6只,正常组6只。给药组按剂量灌胃给予相应药液,正常组和模型组灌胃给予同体积生理盐水,1次/d,连续给药10 d,以1%OVA雾化刺激豚鼠,观察咳嗽次数;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及血清中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)的含量;免疫组织化学法(IHC)观察肺部组织中IL-6、TNF-α的蛋白表达;透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定肺组织中IL-6、白细胞介素-1β(IL-1β)、TNF-αmRNA水平。采用非标记蛋白质组学技术(Label Free)检测各干预组间差异蛋白;网络药理学预测XEHT治疗AC的作用靶点,将蛋白组学及网络药理学的结果进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析并寻找相同的作用通路。结果:与正常组比较,模型组咳嗽次数显著增加(P<0.01),BALF中CRP、TNF-α含量显著升高、SOD显著降低(P<0.01),IL-6、MDA升高(P<0.05),血清中IgA、IgG含量升高(P<0.05,P<0.01),肺组织充血及炎症细胞浸润明显,IL-6和TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.01),Ⅱ型上皮细胞可见大范围低电子密度水肿区,细胞器明显肿胀、空泡化,胞核固缩或染色质稀疏、溶解,IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组咳嗽次数减少(P<0.01)、BALF中CRP、TNF-α、IL-6、MDA含量减少(P<0.05、P<0.01),SOD活性增加(P<0.05),孟鲁司特钠、XEHT中剂量组血清IgA、IgG含量降低(P<0.05,P<0.01),各给药组肺组织充血及炎症细胞浸润及Ⅱ型上皮细胞损伤不同程度缓解,IL-6、TNF-α蛋白表达水平降低(P<0.01),孟鲁司特钠、XEHT中、高剂量组IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达减少(P<0.05,P<0.01),XEHT低剂量组IL-6、TNF-αmRNA表达减少(P<0.05,P<0.01)。Phospholipase D、mTOR及ErbB信号通路在蛋白组学和网络药理学KEGG通路富集中存在交集。结论:蛋白质组学结合网络药理学分析共同揭示了XEHT改善AC的作用与调控Phospholipase D、mTOR及ErbB信号通路密切相关。

关键词： 白藜芦醇   脓毒症脑病   血管内皮损伤   线粒体动力学   HIF-1α  

摘要： 基于网络药理学与动物实验探究白藜芦醇(resveratrol,RES)治疗脓毒症相关脑病(sepsis associated encephalopathy,SAE)脑血管内皮损伤的作用机制.通过网络药理学收集RES和SAE的共有靶点与基因,构建蛋白质相互作用网络,使用基因本体论(Gene Ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Gene and Genomes,KEGG)通路富集分析筛选关键信号通路,并进行分子对接验证.动物实验部分采用盲肠结扎穿孔法(cecum ligation and puncture,CLP)制备脓毒症脑病模型.将小鼠随机分为假手术组,CLP组和RES中、高剂量组.假手术组仅开腹而不进行盲肠结扎和穿孔,CLP组术后给予等体积的0.9%氯化钠溶液腹腔注射.RES中、高剂量组在造模后分别腹腔注射40、60 mg·kg^(-1)的RES,并在12 h后取材.实验结束后,对小鼠进行神经功能评分;检测脑组织湿干重比;氧化应激试剂盒测定血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;HE染色观察脑组织病理变化;透射电镜观察脑血管内皮细胞紧密连接和线粒体超微结构改变;Western blot检测紧密黏连蛋白1(zonula occluden1,ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、紧密连接蛋白5(claudins-5)、视神经萎缩蛋白1(optic atrophy 1,OPA1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2,Mfn 2)、线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、线粒体分裂蛋白1(fission 1,Fis1)、缺氧诱导因子-1α(hypox-ia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白表达.网络药理学结果显示,共获得RES和SAE的76个交集靶点,其中核心靶点排名前五位的是EGFR、PTGS2、ESR1、HIF-1α、***富集分析发现RES通过氧化应激反应参与SAE机制过程;KEGG富集分析表明RES通过HIF-1α、Rap1等信号通路参与SAE治疗;分子对接结果显示RES与HIF-1α等关键靶点具有良好的结合活性.动物实验结果表明,与假手术组相比,CLP组小鼠神经反射下降,脑组织含水量增加、血清SOD、CAT活力降低,MDA含量增高,大脑皮层内皮紧密连接结构破坏,线粒体形态出现明显异常,脑组织中Drp1、Fis1和HIF-1α蛋白表达升高,ZO-1、occludin、claudin-5、Mfn2和OPA1蛋白表达降低.与CLP组相比,RES中、高剂量组的小鼠神经功能有所恢复,脑组织含水量和SOD、CAT活力升高,MDA含量降低,脑组织细胞形态、内皮细胞间紧密连接和线粒体结构得到改善,Drp1、Fis1和HIF-1α蛋白表达降低,ZO-1、occludin、claudin-5、Mfn2和OPA1蛋白表达升高.研究表明,RES通过抑制SAE损伤后的氧化应激反应,改善脑血管内皮屏障功能,维持线粒体稳态,其机制可能与调节HIF-1α信号通路有关.

关键词： 案例教学法   循证医学   抗高血压药理学  

摘要： 目的探讨案例教学法(case-basedlearning,CBL)与循证医学(evidence-based medicine,EBM)相结合的教学模式在抗高血压药理学授课中的实践效果。方法以我校2020级五年制临床医学专业学生为研究对象,试验组采用以临床案例为引导、高血压防治指南为基础的CBL+EBM教学模式,对照组接受传统授课方法。通过课后作业、期末考试成绩分析、问卷调查等形式对学习效果和满意度进行评价。结果试验组抗高血压药部分课后作业成绩平均分、期末考试得分率均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。90.48%的学生认为CBL+EBM教学模式有助于掌握和理解知识点;97.02%的学生认为以临床诊疗指南为线索的课程设计逻辑性更强,有利于临床思维的培养;91.67%的学生认为该教学模式可在药理学其他章节的授课中进行探索和尝试。结论CBL+EBM教学模式可充分发挥药理学的桥梁学科作用,增强了理论知识的实用性,培养了学生的临床逻辑性,使学生的学习积极性和主动性大幅提高,解决实际问题的能力明显增强。

关键词： 葛根芩连汤   羔羊   腹泻   活性成分   靶基因  

摘要： 为分析葛根芩连汤在治疗由非典型肠致病性大肠埃希氏菌引起的羔羊腹泻,使用网络药理学对葛根芩连汤和非典型肠致病性大肠埃希氏菌引起的羔羊腹泻进行研究。葛根芩连汤含有53种活性化学成分,233个药物靶点,共收集到非典型肠致病性大肠埃希氏菌作用于羊的基因靶点和羔羊腹泻相关靶点680个。葛根芩连汤治疗非典型肠道致病性大肠杆菌引起的羔羊腹泻的药物活性成分—基因靶点网络模型,发现PTGS2、AKT1、IL6、VEGFA、CASP8、CASP3和TNF为关键靶点,甲酮素、表小檗碱、槲皮素、β-谷甾醇、山奈酚和黄芩苷含有更多的相关基因靶点,揭示了葛根芩连汤对非典型肠致病性大肠埃希菌引起的羔羊腹泻的药理作用机制。