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关键词： IgA肾病   玉屏风颗粒   Th1/Th2   网络药理学   实验验证   小鼠  

摘要： 目的:基于网络药理学预测玉屏风颗粒治疗IgA肾病(IgAN)的作用机制并进行机制验证。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库检索玉屏风颗粒有效成分;从GeneCards、OMIM、TTD数据库获取IgAN靶点,运用Venny2.1.0、Cytoscape 3.7.2软件分别获取玉屏风颗粒与IgAN两者交集靶点,构建“活性成分-交集靶点-疾病”关系网络;使用String数据库构建蛋白互作网络图,运用DAVID数据库进行GO、KEGG富集分析;通过AutoDock Vina软件对玉屏风颗粒中的主要活性成分与关键靶点进行分子对接验证。选取60只雄性昆明小鼠随机分为正常组10只,造模组50只,造模成功后随机分为玉屏风颗粒高、中、低剂量组及西药对照组,给药8周。免疫荧光法检测IgA在肾组织中的沉积情况;HE染色、糖原染色观察肾组织病理学改变;生化法检测24 h-UTP、BUN、Scr;ELISA法检测血清中IgA,Th1相关因子TNF-α、INF-γ、IL-2表达,以及Th2相关因子IL-4、IL-6表达。结果:网络药理学部分,筛选出玉屏风颗粒活性成分34个,药物靶点222个;疾病靶点1436个;交集靶点102个;主要活性成分为槲皮素、山柰酚、汉黄芩素等;关键靶点有TNF、IL-6、IL-4、IL-2等。分子对接结果表明,主要活性成分与关键靶点均能较好的结合,所有结合能均≤-6.0 kJ/mol;GO富集分析得到生物过程689条、细胞组分54条、分子功能115条;KEGG富集分析得到IL-17、NF-κB等信号通路。动物实验部分,肾组织IgA免疫荧光显示,与正常组比较,模型组肾小球系膜区可见强绿色团块状IgA荧光信号;与模型组比较,各治疗组IgA沉积情况均有所改善,其中玉屏风颗粒高剂量组改善较明显。HE染色显示,与正常组比较,模型组可见肾小球肿胀,系膜细胞、内皮细胞增生,细胞外基质增多,系膜区扩张;与模型组比较,各治疗组肾组织病理损伤均有所减轻;糖原染色显示,与正常组比较,模型组可见系膜细胞增生,细胞外基质增多,给予药物治疗后,各治疗组肾组织病变程度由中重度变为中轻度。与正常组比较,模型组24 h-UTP、BUN、Scr明显升高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组肾功能均有所改善(P<0.01或P<0.05)。与正常组比较,模型组血清中IgA表达明显升高,与模型组比较,各治疗组血清中IgA表达均有所降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组血清中Th1相关因子TNF-α、INF-γ、IL-2表达水平明显降低(P<0.05),各治疗组血清中Th1相关因子TNF-α、INF-γ、IL-2均有所上调。与正常组比较,模型组血清中Th2相关因子IL-4、IL-6表达水平明显升高(P<0.05),使用药物治疗后,各治疗组血清中Th2相关因子IL-4、IL-6表达水平均有所下调。与正常组比较,模型组血清中Th1/Th2比值明显下降(P<0.05),各治疗组血清中Th1/Th2比值均有所上调(P<0.05)。结论:玉屏风颗粒对IgAN模型小鼠具有较好的治疗作用,其机制可能与纠正Th1/Th2失衡有关。

关键词： UPLC-Q-TOF-MS/MS   半枫荷   类风湿性关节炎   网络药理学   分子对接   Toll样受体信号通路   藁本内酯   积雪草酸  

摘要： 目的利用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)分析半枫荷醇提物的主要成分,结合网络药理学进一步探讨半枫荷抗风湿性关节炎有效物质及作用机制。方法依据UPLC-Q-TOFMS/MS表征分析半枫荷醇提物的主要化学成分,结合Pubchem数据库、Swiss Target Prediction数据库预测半枫荷的作用靶点。利用GeneCards数据库、OMIM数据库、PharmGkb数据库获得疾病靶点,用Venny图绘制平台获得成分和疾病的交集靶点;通过String数据库和Cytoscape 3.9.0软件构建化合物-靶点相互网络、蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并筛选核心靶点,利用David数据库对潜在的核心靶点进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并制作GO双侧柱状图、富集结果分析图。用Cytoscape 3.9.0软件构建“活性成分-靶点-疾病-通路”网络图与活性成分与潜在靶点的网络图。用PyMOL和AutoDock Vina软件进行分子对接。结果从半枫荷醇提物中鉴定84个成分,从数据库筛选出43种活性成分,对应561个潜在靶点,其中与类风湿性关节炎交集靶点55个;经PPI网络分析后,获取核心靶点10个:IL-6、TNF、IL-1β、ALB、CCR5、PTGS2、TLR4、MMP9、NFKB1、STAT1。经有效成分-靶点网络得药物有效成分5个:光甘草内酯、泽泻醇C-23-醋酸酯、藁本内酯、洋川芎内酯A、积雪草酸。主要涉及通路:TNF信号通路、IL-17信号通路、Toll样受体信号通路、C型凝集素受体信号通路、脂质和动脉粥样硬化。分子对接结果有较好的结合能力。结论通过结合UPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学及分子对接的方法初步阐明了半枫荷是通过多成分、多靶点、多途径发挥抗类风湿性关节炎的作用,为半枫荷的进一步质量评价及药理活性的研究提供参考。

关键词： 网络药理学   槲寄生   黄芪   老年高血压病  

摘要： 背景:高血压是多种心血管疾病的重要风险因子之一,我国老年高血压病存在患病率高、控制率低的特点。益肾降压方为临床治疗老年高血压病的有效方剂,槲寄生与黄芪药对是组方的精髓,但其作用机制尚不明确。网络药理学能够阐明药理作用机制、寻找药效物质基础和潜在靶点。目的:基于网络药理学方法探究益肾降压方中槲寄生-黄芪药对治疗老年高血压病的作用机制。方法:检索TCMSP数据库,筛选槲寄生、黄芪的活性成分及靶点,利用UniProt数据库对靶点信息进行标准化,通过GeneCards数据库获取老年高血压病相关疾病靶点,在Venny 2.1.0在线平台上制作韦恩图,获得槲寄生、黄芪与疾病的共同靶点,通过Cytoscape软件构建药物-活性化合物-靶点-疾病网络,通过STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,利用DAVID数据库对交集靶点进行富集分析。结果:筛选得到槲寄生-黄芪药对治疗老年高血压病的核心成分为槲皮素、异鼠李素、刺芒柄花素、β-谷甾醇、山柰酚等,核心靶点包括白细胞介素(Interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT Serine/Threonine Kinase 1,AKT1)、血管内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A,VEGFA)、基质金属蛋白酶9(Matrix Metalloproteinase 9,MMP9)等,主要通路有脂质和动脉粥样硬化、流体剪切应力和动脉粥样硬化、核因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinase,MAPK)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路、Toll样受体信号通路等。结论:槲寄生、黄芪可以通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗老年高血压病的作用,为临床继续深入研究老年高血压病的机制提供了思路与线索。

关键词： 落新妇   类风湿性关节炎   网络药理   抗炎活性  

摘要： 本研究以网络药理学和体外实验相结合的综合策略为基础,预测落新妇改善风湿性关节炎的可能活性成分与作用机制。首先从文献中获取落新妇的有效化合物,从Dis Ge NET、Gene Cards和OMIM数据库分别筛选出与RA相关的靶点,然后构建化合物-靶标网络和蛋白-蛋白相互作用网络,以预测落新妇可能的关键成分及药物靶点,最后通过体外实验进行验证。最终筛选出29个潜在活性成分和117个交叉药理靶标,其关键活性成分可能是落新妇酸、3β-乙酰基齐墩果酸、3β-羟基齐墩果-12-烯-27-酸、4-O-没食子酰岩白菜素和儿茶素,关键作用靶点可能是AKT1、MMP9、EGFR、CASP3和HSP90AA1;GO富集分析显示信号转导、蛋白水解和细胞凋亡过程的负调控与落新妇治疗RA机制密切相关;KEGG通路分析表明癌症、破骨细胞分化和内分泌抵抗信号通路与落新妇干预RA有关。体外实验表明落新妇提取取物可以抑制巨噬细胞炎症因子NO、TNF-α和IL-6的分泌,降低诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、TNF-α和IL-6在LPS诱导的RAW 264.7细胞中的m RNA表达。本研究增加了中药落新妇及其有效成分抗RA药理作用的新认识,也为后续研究提供思路与依据。

关键词： 中药药理学   课程思政   教学改革  

摘要： 文章以中药学专业学生为研究对象,采用多种教学方法,并通过开展“扬中医药文化,展中药人风采”专题活动,引导学生走进中医药人,了解中医药事。与对照班比较,教学改革并不影响学生对理论知识的学习效果,而且能够增强学生的中医药文化自信,提高学生的学习潜能,培养学生的团队合作与创新精神。

关键词： 柴胡   白芍   药对   网络药理学   分子对接   肝损伤  

摘要： 目的基于网络药理学和分子对接技术探讨柴胡-白芍药对治疗肝损伤(LI)的作用机制。方法运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)以口服生物利用度(OB)≥0.30且类药性(DL)≥0.18为条件筛选得到柴胡-白芍药对的活性成分化合物及对应靶点,运用Pubchem平台获取靶点Canonical SMILES号,通过SwissTargetPrediction及TargetNet数据库预测并获取有效靶点;运用GeneCards及OMIM数据库获取LI疾病基因靶点;Venn2.1平台进行拓扑分析,获取疾病与活性成分的交集靶点;将交集靶点导入String数据库,获取蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,靶点网络以PPI阈值0.9为标准,隐藏游离靶点,下载PPI可视化图和交集靶点.TSV文件;运用Excel建立“药物-活性成分-靶点”表,导入Cytoscape 3.9软件构建关系网络,并进行可视化;运用DAVID数据库将柴胡-白芍药对治疗LI的作用靶点进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,获取数据,并利用微生信数据可视化平台进行可视化。根据Degree值运用Auto Dock Vina v.1.2.0软件将排名前5的核心作用靶点与柴胡-白芍的核心活性成分进行分子对接,得到对接结合能以及对接结果文件。结果共筛选得到柴胡-白芍药对活性成分27个,包括山柰酚、异鼠李素、槲皮素、β-谷甾醇等;柴胡-白芍药对抗LI的核心靶点216个,排名前5的靶点分别为蛋白激酶B1(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白白细胞介素6(IL6)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR);KEGG富集分析结果显示,柴胡-白芍药对抗LI主要涉及PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路等。分子对接结果显示,活性成分与核心靶点的结合构象稳定。结论柴胡-白芍药对可能通过作用于AKT1、TNF、IL6、VEGFA、EGFR等核心靶点,调控PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路等相关通路,发挥治疗LI的作用。

关键词： 网络药理学   计算机辅助药物设计   雷诺嗪   心肌缺血再灌注损伤   心律失常  

摘要： 目的利用网络药理学方法和计算机辅助药物设计策略,分析雷诺嗪对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常的潜在治疗靶点及机制。方法采用Swiss Target Prediction数据库和DrugBank数据库预测雷诺嗪潜在的作用靶点。采用GeneCards数据库搜集MIRI和心律失常疾病的靶点,检索时间为建库至2023年1月26日,将雷诺嗪、MIRI和心律失常相关靶点进行交集比对以获取雷诺嗪治疗MIRI致心律失常的关键靶点。利用STRING数据库和Cytoscape软件绘制靶点蛋白互相作用网络。利用DAVID数据库对靶点进行信号通路富集分析。利用Cy-toscape软件构建药物-靶点-信号通路网络。利用分子对接软件验证雷诺嗪与交集靶点结合能力。最后通过分子相似性分析及分子动力学模拟研究,验证预测靶点的准确性。结果筛选获得雷诺嗪治疗MIRI致心律失常的潜在作用靶点30个。通过蛋白互相作用分析共获得8个核心靶点,包括SRC、PIK3CA、MAPK8、MAPK14、JAK1、MAP2K1、JAK2和PIK3CG。GO生物分析共筛选出177个生物学过程,其中包括123个细胞生物过程,23个细胞组成和31个分子功能。KEGG分析发现119条相关信号通路。分子对接分析结果显示,雷诺嗪与8个核心靶蛋白均具有较好的亲和力。分子相似性分析结果显示,雷诺嗪与8个核心靶蛋白原配体都存在一定相似性。分子动力学模拟了相关性最高的3个靶点(SCR、PIK3CA和MAPK8),结果显示雷诺嗪表现出MAPK8和SCR抑制剂潜力,而对PIK3CA的抑制剂位点结合潜力相对较差,结合文献复习,推测出雷诺嗪对MIRI致心律失常治疗作用的最相关分子机制。结论雷诺嗪可通过多靶点、多途径治疗MIRI致心律失常,这对促进治疗MIRI致心律失常靶向药物的研发及临床应用具有重要意义。

关键词： 乳腺肿瘤   黄芪解毒汤   网络药理学   分子对接  

摘要： 目的利用网络药理学及分子对接技术探讨黄芪解毒汤(HQJD)治疗乳腺癌正虚毒炽证的作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台筛选HQJD的主要活性成分及靶点,利用OMIM、GeneGards和Drugbank数据库等获取乳腺癌正虚毒炽证相关靶点,取交集获得HQJD治疗乳腺癌正虚毒炽证的相关靶点;使用Cytoscape 3.9.1软件在String 11.0数据库基础上构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络以及"药物-活性成分-靶点-疾病"网络,并根据拓扑参数推断HQJD治疗乳腺癌正虚毒炽证的核心活性成分及核心靶点。通过R语言对核心靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;并对主要活性成分和核心靶点进行分子对接验证。结果筛选得到HQJD活性成分的有效作用靶点230个,乳腺癌正虚毒炽证活性成分15 467个;交集靶点217个;GO功能富集分析显示,HQJD治疗乳腺癌正虚毒炽证主要涉及氧化应激、细胞化学应激等;KEGG通路富集分析显示,HQJD治疗乳腺癌正虚毒炽证主要与磷脂酰肌醇3-蛋白激酶B(PI3K-Akt)、白介素-17(IL-17)等信号通路有关,分子对接结果显示β-谷甾醇、豆甾醇、木犀草素等主要活性成分与核心靶点具有较好的结合能力。结论 HQJD治疗乳腺癌正虚毒炽证具有多成分、多靶点和多通路的特点,其主要机制可能与PI3K-Akt、IL-17、P53等信号通路有关。

关键词： 慢性阻塞性肺疾病急性加重期   通塞颗粒   网络药理学   分子对接技术   核心靶点   信号通路  

摘要： 目的:基于网络药理学方法、分子对接技术和动物实验验证探讨通塞颗粒治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)的作用机制。方法:(1)预测分析。通过中药系统药理学分析平台筛选通塞颗粒的活性成分及其对应靶点;利用人类基因(Genecards)、在线人类孟德尔遗传数据系统(OMIM)等数据库检索AECOPD疾病基因;绘制韦恩图并获取药物-疾病共同靶点;构建通塞颗粒活性成分-靶点网络图和蛋白质相互作用网络图,根据网络关系筛选核心靶点;借助R语言软件进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,使用AutoDockTool 1.5.6软件对通塞颗粒关键活性成分和核心靶点进行分子对接。(2)实验验证。随机将50只SD大鼠分为对照组、模型组、中药组、西药组、联合组各10只。除对照组外,其余各组均构建AECOPD大鼠模型,并于急性加重前2 d及其后4 d予药物灌胃治疗。治疗结束后检测各组大鼠的肺功能指标[0.3 s用力呼气容积(FEV_(0.3))、用力肺活量(FVC)、0.3 s用力呼气容积与用力肺活量的比值(FEV_(0.3)/FVC)、呼气流量峰值(PEF)],检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-17含量,通过苏木精-伊红染色法(HE)观察气道与肺组织的病理改变,采用免疫印迹法和酶联免疫吸附测定法初步验证网络药理学的预测结果。结果:通塞颗粒治疗AECOPD的关键活性成分为槲皮素、芹黄素、木犀草素、山奈酚、β-谷甾醇,主要作用于肿瘤抑制蛋白53(TP53)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)等核心靶点。GO富集分析和KEGG通路富集分析结果表明,通塞颗粒治疗AECOPD与TNF、IL-17等信号通路干预氧化应激、减少细胞凋亡、抑制炎症反应有关。分子对接结果显示,通塞颗粒的关键活性成分与治疗AECOPD的核心靶点均有较好的结合活性。动物实验研究结果显示,模型组FVC、FEV_(0.3)、FEV_(0.3)/FVC、PEF值均较对照组降低(P<0.05)。中药组、西药组以及联合组的FVC、FEV_(0.3)、PEF值均较模型组升高(P<0.05);联合组FEV_(0.3)/FVC值较模型组升高(P<0.05)。中药组FVC、FEV_(0.3)、FEV_(0.3)/FVC、PEF值与西药组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。联合组FVC、PEF值均较中药组及西药组升高(P<0.05);联合组FEV_(0.3)较西药组升高(P<0.05)。模型组血清TNF-α、IL-17含量均高于对照组(P<0.05);中药组、西药组及联合组的TNF-α、IL-17含量均低于模型组(P<0.05);联合组血清TNF-α、IL-17含量均低于中药组、西药组(P<0.05)。模型组肺组织磷酸化P65/非磷酸化P65、磷酸化AKT/非磷酸化AKT、磷酸化MAPK1/3/非磷酸化MAPK1/3和非磷酸化TP53/GAPDH蛋白表达含量均高于对照组(P<0.05);中药组、西药组以及联合组上述蛋白表达含量均低于模型组(P<0.05);联合组上述蛋白表达含量均低于中药组、西药组(P<0.05)。结论:通塞颗粒治疗AECOPD具有多成分、多靶点、多通路、整体调节的作用特点,为后续深入研究提供了数据支持。

关键词： 健脾消癌方   网络药理学   结直肠癌   超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱  

摘要： 目的探讨健脾消癌方的活性成分及其治疗结直肠癌(CRC)的作用机制。方法采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术鉴定健脾消癌方化学成分;通过TCMSP、SwissTargetPrediction数据库筛选活性成分及靶蛋白,STRING数据库进行蛋白相互作用分析,GeneCards数据库筛选CRC相关靶点,DAVID数据库进行GO和KEGG通路富集分析;对主要活性成分与关键靶点进行分子对接验证;构建CRC裸鼠模型,采用Western blot检测健脾消癌方对裸鼠CRC相关通路关键靶点的影响。结果筛选得到健脾消癌方活性成分35个,潜在作用靶点617个,与CRC相关靶点的交集靶点325个。活性成分作用靶点富集分析表明,主要富集在PI3K-Akt信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制、癌症中的蛋白多糖、T细胞受体信号通路、VEGF信号通路等相关通路。得到健脾消癌方作用于CRC的13个关键活性成分和6个关键靶蛋白EGFR、SRC、CA2、CA12、CYP19A1、MAPK3。Western blot实验结果表明,健脾消癌方可显著降低大鼠CRC样本中SRC、EGFR蛋白表达水平。结论健脾消癌方中活性成分可能通过调控EGFR、SRC,多靶点、多途径发挥抗CRC细胞增殖、侵袭及转移的作用。