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关键词： 溃疡性结肠炎   新橙皮苷   网络药理学   MAPK信号通路  

摘要： 目的 基于网络药理学及动物实验探讨新橙皮苷治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用及其机制。方法选择TCMSP、TCMIP、Swiss Target Prediction、SymMap、BATMAN-TCM数据库检索新橙皮苷潜在蛋白靶点,在DisGenet及Genecards数据库中检索UC的基因靶点,获取新橙皮苷治疗UC的潜在交集靶点。采用KEGG信号通路和GO功能富集分析筛选新橙皮苷治疗UC的关键信号通路;使用STRING生物信息学数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络,筛选获取新橙皮苷治疗UC的核心靶标。采用随机数字表法将30只雄性SPF级C57BL/6小鼠分为对照组、模型组和低、中、高剂量组,每组6只。采用2%的葡聚糖硫酸钠(DSS)构建UC小鼠模型。低、中、高剂量组分别给以0.5、5、50 mL/(kg·d)新橙皮苷溶液灌胃造模的小鼠,对照组和模型组予等量蒸馏水灌胃,持续7 d。采用小鼠疾病活动指数(DAI)及小鼠体质量变化评估小鼠疾病情况;IHC检测网络药理学预测获得的相关核心靶标蛋白表达情况。结果 网络药理学分析获得2 374个UC疾病靶点、101个新橙皮苷作用靶点和51个新橙皮苷与UC共同靶点。GO富集功能分析显示这些共同靶点涉及50个生物过程、20个细胞组分和42个分子功能。KEGG通路分析筛选获得MAPK信号通路、癌症的发病途径、癌症中的蛋白多糖、内分泌耐药、雌激素信号通路、糖尿病并发症的AGE-RAGE通路、IL-17信号通路等66条通路。PPI网络拓扑分析获得MAPK14、ALB、ESR1、FN1、CASP3、PTGS2、CAT、IFNG、HRAS、FGF2及AR等核心靶点。动物实验证实新橙皮苷可降低UC小鼠DAI评分,减少UC小鼠体质量的下降,显著下调UC小鼠结肠组织中p38(MAPK14)蛋白的磷酸化水平(P<0.05)。结论 新橙皮苷治疗溃疡性结肠炎的作用机制可能与降低MAPK通路中p38磷酸化水平有关。

关键词： 网络药理学   白芍   慢性萎缩性胃炎   活性成分   作用机制  

摘要： 目的:采用网络药理学方法,对白芍治疗慢性萎缩性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis,CAG)的作用机制进行探讨。方法:运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得白芍有效活性成分与相应靶点信息。通过GeneCards、OMIM、DisGeNET数据库搜集CAG的相关靶标信息,并通过Venny 2.1.0取得药物与疾病靶点的交集。分别采用Cytoscape 3.7.1、STRING数据库绘制“药物活性成分-靶点”网络图与蛋白质-蛋白质相互作用网络图,行可视化处理。借助DAVID数据库行基因本体论(GO)功能、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。最后用软件Cytoscape 3.7.1绘制“药物成分-靶点-通路-疾病”网络。结果:得到白芍活性成分8个、作用靶点72个,疾病靶点972个,二者交集34个。关键活性成分有山柰酚、β-谷甾醇、儿茶素,关键靶点有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt Serine/Threonine Kinase 1,AKT1)、肿瘤坏死因子、白细胞介素-6等;白芍主要通过参与凋亡过程阳性调节、对药物的反应、炎症反应等生物过程,调节癌症的途径、晚期糖基化终末产物(Advanced Glycation End products,AGE)-晚期糖基化终末产物受体(Advanced Glycation End products Receptor,RAGE)、爱泼斯坦-巴尔病毒感染等通路来发挥抗CAG的作用。分子对接结果显示,筛选出的药物活性成分与关键靶标间具有较好的结合活性。结论:本研究已初步揭示白芍抗CAG的作用机制,为CAG在中医药领域的治疗作用及新的药物研发奠定基础。

关键词： 肺癌   天花粉   网络药理学   分子对接   小分子化合物   作用机制   探讨  

摘要： 目的基于网络药理学和分子对接的方法探讨天花粉治疗肺癌的作用靶点及机制。方法检索时限为建库至2022年7月。采用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、中医药综合数据库(TCMID)结合PubChem数据库相关文献筛选出天花粉的活性成分,通过TCMSP、TCMID、SwissTargetPrediction数据库获取活性成分的潜在靶点;检索GeneCards、人类孟德尔遗传综合数据库(OMIM)、TTD、DrugBank数据库收集肺癌疾病靶点;利用线上网站Venny 2.1将药物与疾病靶点取交集并绘制韦恩图;应用String数据库绘制交集靶点的蛋白互作网络;使用Cytoscape 3.8.2软件构建“药物-活性成分-疾病-靶点”网络图;运用Metascape数据库对共同靶点进行基因本体(GO)富集化分析和京都基因和基因组数据库(KEGG)通路富集分析;采用Autodock软件进行分子对接验证。结果天花粉通过筛选得到活性成分28种,201个作用靶点;检索4大疾病数据库共获取肺癌靶点1645个;药物与疾病共有37个交集靶点;根据连接度(degree)值大小,确定雌激素受体1(ER1)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、表皮生长因子受体(EGFR)为核心靶点。GO富集分析发现天花粉可能通过调节腺体发育、细胞增殖、细胞黏附、酶、受体、蛋白质的活性等治疗肺癌。KEGG通路富集分析显示天花粉可能作用于化学致癌受体激活、癌症通路、缺氧诱导因子1(HIF-1)信号通路、癌症中的微RNA、蛋白聚糖等发挥作用。分子对接结果显示,关键小分子化合物与核心靶点的结合活性显著。结论天花粉通过多靶点、多通路机制发挥治疗肺癌的作用,为后续实验和临床应用奠定基础。

关键词： 加味小柴胡汤   咳嗽变异性哮喘   表皮生长因子受体   丝裂原活化蛋白激酶   RELA癌基因   地塞米松   分子对接  

摘要： 目的通过网络药理学、分子对接和实验验证对加味小柴胡汤治疗咳嗽变异性哮喘的主要活性成分及潜在作用机制进行探讨。方法应用网络药理学预测加味小柴胡汤治疗咳嗽变异性哮喘可能的作用机制,并通过分子对接预测活性成分的结合位点。构建哮喘大鼠模型,将60只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松片组[0.5 mg/(kg·d)]、加味小柴胡汤组[5 g/(kg·d)],每组15只。正常组、模型组给予生理盐水2 mL灌胃,每日灌胃2次。给药4周后取大鼠血清及肺组织,ELISA法检测血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)、免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)、干扰素-γ(interferon-γ,INF-γ)水平,Western blot法检测肺组织丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、GATA结合蛋白-3(GATA-binding protein-3,GATA-3)表达水平。结果网络药理学共筛选出加味小柴胡汤有效成分1483种,作用靶点274个,咳嗽变异性哮喘相关靶点7509个,其交集靶点204个。GO和KEGG富集分析主要涉及信号转导、炎症反应、细胞凋亡等一系列的生物学反应过程,主要参与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)、丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)、RELA癌基因(RELA proto-oncogene,RELA)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen P53,TP53)、细胞性骨髓细胞瘤病病毒癌(myelocytomatosis virus carcinoma,MYC)和蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PRKCA)等靶点的调控。分子对接结果表明,筛选得到的主要活性成分与靶点有较强的结合力。与正常组比较,模型组大鼠肺组织中IL-6、IL-13、IgE、MAPK、GATA-3升高(P<0.05),INF-γ降低(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松片组及加味小柴胡汤组IL-6、IL-13、IgE、MAPK、GATA-3降低(P<0.05),INF-γ升高(P<0.05)。与地塞米松片组比较,加味小柴胡汤组大鼠IL-6、IL-13、IgE降低(P<0.05),INF-γ升高(P<0.05)。结论加味小柴胡汤对咳嗽变异性哮喘具有治疗作用,其作用机制可能与EGFR、MAPK1、MAPK3、RELA、TP53、MYC和PRKCA靶点有关。

关键词： 温经汤   多囊卵巢综合征   网络药理学   血管内皮生长因子   蛋白激酶B  

摘要： 目的:基于网络药理学与动物实验,探讨温经汤治疗多囊卵巢综合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)的作用机制。方法:在TCMSP、BATMAN-TCM、Gene Cards、Dis Genet数据库分别检索温经汤的主要活性成分与靶点,PCOS疾病靶点,并将药物靶点与疾病靶点取交集。运用STRING数据库进行蛋白质相互作用分析,借助Metascape平台进行基因本体GO功能富集分析和京都基因与基因组百科全书KEGG通路富集分析。通过来曲唑联合高脂饲料诱导PCOS小鼠模型,给予不同剂量温经汤干预,观察各组小鼠体质量变化,空腹血糖水平及卵巢组织病理形态;采用ELISA法与免疫组化法检测小鼠血液与卵巢组织中核心靶点和核心通路的表达。结果:温经汤筛选出活性成分253个,主要包括苯代南蛇碱、甘草酚、芍药素酮、吴茱萸碱、等,与536个疾病靶点取交集后得到118个共同靶点,核心靶点包括AKT1、TP53、STAT3、TNF、VEGFA、IL6和EGFR等;GO富集在BP中主要包括激素反应、多肽反应、促进蛋白质磷酸化、等;MF主要包括蛋白质同源二聚体活性、血红素结合蛋白和四吡咯结合等;CC主要包括核膜、侧膜及膜筏等;KEGG富集发现HIF-1、PI3K/AKT及TNF等信号通路能在温经汤治疗PCOS中起关键作用。动物实验结果显示,与正常对照组比较,模型对照组体质量变化量显著增加(P<0.01),空腹血糖含量明显增加(P<0.05),血清中IL-6、TNF-α含量显著升高(P<0.01),卵巢组织中VEGFA表达显著上调,AKT、HIF-1α表达显著下调(P<0.01),卵巢组织中原始卵泡数量增多,卵泡颗粒细胞层数减少,卵巢指数显著降低(P<0.05);与模型对照组相比,温经汤10.14、20.28、40.56 g/kg组小鼠体质量变化量明显降低(P<0.05),血清中IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.01),卵巢组织中VEGFA表达显著下调,AKT、HIF-1α表达明显上调(P<0.05或P<0.01),卵泡颗粒细胞层厚度增加,黄体数量增多,可见各发育时期的卵泡。结论:温经汤可干预卵巢组织PI3K/AKT/HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白表达,减轻机体炎性反应,可能是其治疗PCOS的作用机制之一。

关键词： 支气管哮喘   网络药理学   加味止哮平喘汤   作用机制  

摘要： 目的基于网络药理学探讨加味止哮平喘汤治疗支气管哮喘的作用机制。方法获取药物活性成分及关键靶点,然后运用相应数据库预测支气管哮喘的相关靶点,两者取交集后,运用STRING数据库和Cytoscape 3.9.1软件构建蛋白相互作用网络及药物-靶点网络,进行基因本体(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果筛选出核心药物的活性成分404个,交集靶点202个。GO功能分析得到180条分子功能,KEGG通路富集分析得到179条通路。结论通过网络药理学分析,预测了加味止哮平喘汤治疗支气管哮喘的作用机制,为临床研究提供了参考。

关键词： 生血通便颗粒   慢传输型便秘   Cajal间质细胞   内质网应激   细胞凋亡   网络药理学  

摘要： 目的采用网络药理学预测生血通便颗粒治疗慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)的潜在作用机制,并进行动物实验验证。方法利用TCMSP数据库和BATMAN-TCM数据库筛选生血通便颗粒的活性成分及作用靶点,通过GeneCards数据库和OMIM数据库筛选STC疾病相关靶点,构建“活性成分-疾病靶点”网络,使用R语言对交集基因进行GO及KEGG富集分析。大鼠采用盐酸洛哌丁胺混悬液[3 mg/(kg·d)]灌胃建立STC模型。将大鼠分为正常组(等体积蒸馏水)、模型组(等体积蒸馏水)、莫沙比利组[1.35 mg/(kg·d)]、生血通便颗粒低剂量组[1.44 g/(kg·d)]、生血通便颗粒高剂量组[2.88 g/(kg·d)],每组8只,每日灌胃1次,连续治疗14 d。记录治疗后肠道推进率;HE染色观察结肠组织病理学改变;免疫组织化学法检测结肠组织酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase receptor,c-Kit)表达;TUNEL染色检测结肠组织Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)凋亡情况;Western blot检测结肠组织葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、活化型胱天蛋白酶-3(cleaved cysteine aspartic acid specific protease-3,cleaved Caspase-3)蛋白表达水平。结果筛选出生血通便颗粒活性成分74个,对应的作用靶点为492个,CASP3(Caspase-3)、Bcl-2、Bax凋亡基因是STC的核心靶点之一,其相关的作用通路为内质网应激信号通路。动物实验结果表明,与正常组比较,模型组大鼠肠道推进率降低(P<0.01);结肠黏膜萎缩、变薄,黏膜上皮层有缺失,固有层腺体缺损破坏明显,可见炎性改变;结肠组织中c-Kit表达降低(P<0.01);凋亡细胞绿色荧光增加、c-Kit红色荧光减少,ICC凋亡指数升高(P<0.01);结肠组织GRP78、CHOP、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01)。与模型组相比,莫沙必利组及生血通便颗粒低、高剂量组大鼠肠道推进率提高(P<0.01);结肠黏膜结构较完整,炎性情况有所恢复,腺体排列较整齐;结肠组织中c-Kit表达升高(P<0.01);凋亡细胞绿色荧光减少、c-Kit红色荧光增加,ICC凋亡指数降低(P<0.01);结肠组织GRP78、CHOP、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01)。与莫沙必利组相比,生血通便颗粒高剂量组肠道推进率提高(P<0.05)、c-Kit表达升高(P<0.05)、ICC凋亡指数降低(P<0.05);生血通便颗粒低、高剂量组结肠组织中GRP78、CHOP、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.01),生血通便颗粒高剂量组Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论生血通便颗粒可通过抑制内质网应激GRP78/CHOP信号通路,调控Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3凋亡蛋白表达,从而抑制ICC凋亡以达到治疗STC的作用。

关键词： 糖尿病   天花粉   网络药理学   液质联用  

摘要： 目的 通过超高效液相色谱联用质谱技术(UPLC-MS)分析中药天花粉中的化合物成分,结合网络药理学和分子对接技术探究天花粉防治糖尿病的作用机制。方法 应用液质联用技术解析天花粉水提物,获取天花粉成分及结构并筛选得到潜在活性成分。通过Swiss Target Prediction数据库对潜在活性成分进行靶点预测,从GeneCards数据库收集糖尿病相关疾病靶点并取二者交集靶点。应用STRING网站和Cytoscape软件构建蛋白质互作网络并筛选得到核心靶点。将核心靶点导入Metascape网站进行GO和KEGG分析。结果 液质联用解析得到天花粉15种药物成分,筛选出Cucurbitacin D(葫芦素D)等6种潜在活性成分,分析得61个天花粉防治糖尿病靶点。GO富集分析主要包括脂肪酸代谢、单羧酸代谢、类固醇羟化酶活性等脂质代谢和氧化应激相关进程。KEGG富集分析主要涉及胰岛素抵抗、内分泌抵抗、糖尿病并发症的AGE-RAGE信号通路等糖尿病防治密切相关的通路。分子对接发现天花粉可能通过Cucurbitacin D作用STAT3、MAPK14、PIK3CA等关键靶点实现改善糖尿病的效果。结论 天花粉具有潜在防治糖尿病的功效,其机制可能是通过Cucurbitacin D等活性成分改善胰岛素抵抗及内分泌抵抗,调控AGE-RAGE等信号通路,从而起到防治糖尿病的作用。

关键词： 火土既济丹   勃起功能障碍   网络药理学   分子对接  

摘要： 目的:基于网络药理学和分子对接探讨火土既济丹治疗勃起功能障碍(ED)的潜在作用机制。方法:利用TCMSP和TCMIP数据库筛选出火土既济丹中的主要有效化合物及其靶点;在Genecards数据库中获取ED的治疗靶点基因;利用Venny软件获得火土既济丹及ED的共同靶点,应用STRING数据库构建火土既济丹治疗ED的蛋白互作网络(PPI),再利用Cytoscape软件筛选出核心靶点,运用R软件对共有靶点进行GO功能分析和KEGG通路分析;最后利用Chem3D、AutoDock Tools及QuickVina-W软件对火土既济丹与核心靶点进行分子对接。结果:共获得有效化合物64个,药物靶点822个,疾病靶点1783个,共同靶点320个。PPI网络分析得到火土既济丹治疗ED的核心靶点包括ESR1、HSP90AA1、SRC、STAT3等。GO功能分析结果显示共同靶点参与对异种刺激的反应、激酶活性的正向调节、MAPK级联反应的正向调控等生物过程。KEGG通路分析提示PI3K-Akt、凋亡、MAPK、HIF-1、VEGF、自噬等信号通路可能与火土既济丹治疗ED的机制有关。分子对接显示火土既济丹关键活性分子与核心靶点均有良好的对接活性。结论:本研究利用网络药理学和分子对接的方法揭示火土既济丹通过多成分、多靶点、多通路治疗ED,为临床治疗及后续的研究提供依据与参考。

关键词： 辣木叶   质量标志物   高效液相色谱法   高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法   特征图谱   网络药理学   新绿原酸   L-色氨酸   隐绿原酸   维采宁-2   异槲皮素   紫云英苷  

摘要： 目的基于辣木Moringa oleifera叶的特征图谱并结合网络药理学,筛选辣木叶的质量标志物(quality markers,QMarker),建立其定量分析方法,为辣木叶的质量评价提供科学依据。方法采用HPLC法建立辣木叶的特征图谱,条件如下:Phenomenex Luna C_(18)(2)100A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相乙腈(A)-0.5%甲酸水溶液(B)梯度洗脱,检测波长254 nm,体积流量0.8 mL/min,柱温35℃,进样量5µL。应用化学计量学方法筛选不同产地的辣木叶差异标志物,基于网络药理学获取辣木叶特征成分的关键靶点及关键通路,绘制出“特征成分-关键靶点-关键通路”网络,以预测辣木叶的调血脂Q-Marker。再以15批辣木叶药材为研究对象,对质量标志物进行含量测定。以五原则为核心确定出最终的Q-Marker。结果建立了15批辣木叶药材的特征图谱,结合高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(high performance liquid chromatographyquadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS/MS)确认了8个共有峰,通过对照品指认出其中6个色谱峰,分别为新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、维采宁-2、异槲皮素、紫云英苷;经化学计量学分析,初步确认新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为不同产地的差异性标志物。经网络药理学确认新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为活性成分,可作用于白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)等5个核心靶点,影响3条关键通路[细胞因子-细胞因子受体相互作用、产生免疫球蛋白A(immunoglobulinA,IgA)的肠道免疫网络、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3 kinase-protein kinase B,PI3K-Akt)信号通路]发挥调血脂作用。结合“五原则”初步预测新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为辣木叶调血脂的潜在的Q-Marker,质量分数分别为5.81、1.91、2.23、6.59、0.94 mg/g。结论建立的质量评价方法准确可靠,在此基础上结合网络药理学所筛选出的质量标志物可为辣木叶的质量控制提供参考,为阐明其药效物质基础的作用机制奠定基础。