关键词:
网络药理学
大黄酸
肝毒性
DNA损伤
细胞凋亡
摘要:
目的通过网络药理学初步探究大黄致肝毒性潜在作用机制,并结合细胞实验进行验证。方法基于网络药理学,通过多种数据库进行成分收集、靶点预测;结合软件进行PPI网络构建、GO富集分析和KEGG通路分析,系统性预测大黄致肝毒性作用机制;通过原代肝细胞实验以及Western blot实验对网络药理学预测出的通路信息进行验证。结果网络药理学结果表明,大黄酸(Rhein,RH)为大黄致肝毒性主要成分;得到大黄致肝毒性核心靶点17个;KEGG结果提示DNA损伤以及细胞凋亡是大黄致肝毒性的关键机制之一。原代肝细胞实验以及Western blot实验结果表明,RH能够抑制小鼠原代肝细胞活性,呈时间-剂量依赖性;P450酶广谱抑制剂1-氨基苯并三唑(1-aminobenzotriazole,ABT)和CYP2C9抑制剂磺胺苯吡唑(Sulfaphenazole,SFP)能够显著降低RH对小鼠原代肝细胞的毒性,CYP2C9诱导剂利福平(Rifampicin,RFP)能够增加RH对小鼠原代肝细胞的毒性;经不同浓度RH处理后,小鼠原代肝细胞PARP-1、γ-H2AX蛋白上调。结论大黄中RH能够显著抑制小鼠原代肝细胞活力,其对小鼠原代肝细胞的毒性可能是CYP2C9对RH代谢活化所致;RH可激活PARP-1,使H2AX磷酸化,诱导小鼠原代肝细胞DNA损伤,从而导致细胞凋亡。