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关键词： 长春新碱   乳腺癌   网络药理学   基因功能   信号通路  

摘要： 目的 基于网络药理学预测长春新碱治疗乳腺癌的作用机制,并进行实验验证。方法 通过靶点预测技术与生物信息学相结合的方法,预测长春新碱治疗乳腺癌的作用靶点并对其进行功能/通路富集分析,利用Westernblot检测NPM1,DHX9,EEF1A及HSP90蛋白表达。结果 利用SwissTargetPrediction数据库检索出长春新碱具有107个靶点基因,在OMIM中获得506个与乳腺癌密切相关的靶点基因。利用Cytoscape软件绘制长春新碱与乳腺癌的蛋白互作关系网络图,采用网络拓扑分析方法获得70个关键基因。利用ClueGO对70个关键基因进行富集分析。结果显示,长春新碱影响包括白介素7(IL-7)介导的信号通路、mRNA稳定性、蛋白质-DNA复合体、蛋白质定位于线粒体的正向调控等生物过程,也能作用于分子功能如泛素蛋白连接酶、淀粉样蛋白的反应等,并通过调控转录失调、细胞周期、抗原处理和递呈等相关信号通路影响癌细胞生命活动。同时Western blot结果表明长春新碱(200 nmol/L)能下调NPM1,DHX9,EEF1A及HSP90蛋白表达。结论 长春新碱通过多途径多靶点接作用于乳腺癌细胞从而达到抑制乳腺癌的作用。

关键词： 人参   党参   白术   溃疡性结肠炎   网络药理学  

摘要： 目的:利用网络药理学方法探究党参替代人参治疗溃疡性结肠炎的可行性。方法:利用YATCM数据库筛选人参、党参和白术化学成分并通过Swisstargetpredition数据库预测可能靶点;在Gene Cards、Drug Bank、Disgenet数据库中筛选疾病靶点,利用Venny在线软件分别获得党参-白术和人参-白术与溃疡性结肠炎(UC)的交集靶点,使用Metascape数据库进行京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,利用STRING数据库和Cystoscope 3.8.2软件分别构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络和“通路-靶点-成分-药物”网络。结果:人参-白术与UC有93个交集靶点(RS组),党参-白术与UC有76个交集靶点(DS组),两组药对共同作用于TNF、AKT1、STAT3、VEGFA等核心靶点,通过细胞因子-细胞因子受体相互作用等关键KEGG通路和蛋白质磷酸化的正调控、激素水平的调节和对肽的反应等生物学过程对UC发挥治疗作用,人参中有大于75%的作用机制可以在党参中发现。但二者仍有一定差异性,人参中起主要治疗作用的成分是人参皂苷,IL-6和TP53是RS组的特有靶点;而党参中起主要治疗作用的是三萜类和甾醇类,ERBB2是DS组的特有靶点。结论:人参-白术和党参-白术在治疗溃疡性结肠炎中虽药效物质基础差异较大,但作用机制相似,故临床用党参代替人参与白术配伍有一定科学依据。

关键词： 雨课堂   高等教育   形成性评价  

摘要： 随着科学技术的不断进步,社会进入信息化时代。信息技术的运用丰富了教学方法,对学医和行医也带来巨大的改变。雨课堂是在“互联网+”时代下产生的新型的教学平台,具有多种教学和学习功能。本文就雨课堂在高职医学院校《药理学》教学过程中形成性评价的应用遇到的问题及采取的对策进行总结,以期更好地运用雨课堂提高教学质量。

关键词： 通窍益智颗粒   血管性痴呆   含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1   网络药理学   作用机制  

摘要： 目的:采用网络药理学和分子对接技术筛选通窍益智颗粒干预焦亡途径的活性成分及关键靶点,通过体内实验验证该方对血管性痴呆大鼠海马区神经元焦亡的影响。方法:利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)以及文献查找获取通窍益智颗粒的活性成分以及靶点信息;以Caspase-1为关键词,通过GeneCards、OMIM、TTD数据库搜集Caspase-1的靶点,运用Cytoscape3.7.1构建“中药-化合物-交集基因”调控网络;通过STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析;运用Metascape数据分析平台进行GO富集以及KEGG通路富集分析;采用分子对接技术对关键靶点和化合物的相互作用进行验证;将30只SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、尼莫地平6.25 mg/kg组、通窍益智颗粒6.2、12.4、24.8 g/kg组,采用Morris水迷宫试验检测大鼠的认知能力;HE染色观察海马组织病理损伤;透射电镜观察海马神经元细胞超微结构;Western blot法检测P65、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18、IL-1β蛋白的表达。结果:网络药理学筛选得到关键活性成分槲皮素、熊果酸、葛根素、山柰酚、等,关键靶点包括PTGS2、AKT1、STAT3、TP53、TNF、JUN、等,GO富集分析显示主要涉及细胞死亡的正调控、对脂多糖的反应、参与凋亡过程的半胱氨酸型内肽酶活性、等,KEGG通路富集分析涉及FoxO信号通路、JAK-STAT信号通路、MAPK信号通路、NF-κB信号通路、等,分子对接显示活性成分与关键靶点结合性较好。体内实验证实,通窍益智颗粒能有效改善VaD大鼠学习记忆能力以及海马组织病理损伤,逆转神经元焦亡形态改变,明显下调焦亡相关蛋白P65、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18、IL-1β蛋白表达(P<0.05)。结论:通窍益智颗粒多靶点、多途径调控VaD大鼠海马区神经元焦亡,下调焦亡相关蛋白表达,抑制炎症反应,减轻神经元损伤,改善认知功能障碍。

关键词： 药理学   “线上+线下”混合式教学   案例教学   启发式教学   PBL教学模式   分组讨论   药物知识运用抢答  

摘要： 药理学是基础医学与临床医学以及医学和药学的桥梁学科,本课程采用线上网络教学与课堂讲授相结合的“线上+线下”混合式教学模式,充分利用网络教学平台,教学过程中采取“案例教学”、“归纳法”、“启发式”、“PBL教学模式”、“讨论式”、“探索式”等教学方式,开展“案例分析”、“分组讨论”、“药物知识运用抢答”等多种课堂活动,提高学生的主体地位和学习主动性、积极性,进而提高我校学生的理论知识水平和临床用药技能。本课程的改革创新以提高教育教学质量为目标,注重符合新时代需求的新医科人才培养,对于推动我校成为教学研究型高水平大学具有十分重要的意义。

关键词： 帕加马的盖伦   希波克拉底注疏   药理学   解剖学  

摘要： 在生物医学、免疫疗法和纳米机器人学兴起之际,当代读者通过阅读2世纪希腊医生盖伦的著作,能够从中学到什么?本文通过研究盖伦在医学和哲学领域的双重训练和学说,并考察他从在帕加马担任角斗士的医生,到在罗马担任御医的从医生涯,试图了解盖伦如何通过其著作建立起一个全面的医学体系。在近15个世纪的漫长历史中,这一医学体系是东(今中东和近东地区)西方医学领域不可撼动的权威。

关键词： 芎芷地龙汤   偏头痛   超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法   网络药理学   血浆代谢组学  

摘要： 目的:基于网络药理学和血浆代谢组学探讨芎芷地龙汤(Xiongzhi Dilong decoction,XZDLD)对降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)诱导的偏头痛的作用机制。方法:采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法(ultra-high-performance liquid chromatography-linear trap quadrupole orbitrap mass spectrometry,UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对XZDLD的化学成分进行鉴定。经硬脑膜套管注射CGRP建立偏头痛大鼠模型,通过观察大鼠偏头痛样行为、测定机械痛阈和温度痛阈评估XZDLD治疗偏头痛的疗效。基于网络药理学和血浆代谢组学的联合分析识别其治疗偏头痛的关键靶点,并应用蛋白免疫印迹法和免疫组织化学对相关蛋白进行验证。结果:应用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS共识别出方中38个化合物。与模型大鼠相比,XZDLD各组在前30分钟显著改善了偏头痛样行为(均P<0.05),并在第19‒22天提高了机械痛阈(均P<0.05),在第20‒22天提高了温度痛阈(均P<0.05)。基于网络药理学识别出128个XZDLD治疗偏头痛的潜在靶点。基于血浆代谢组学识别出在对照组、模型组和XZDLD组中有17种不同的内源性代谢产物,主要与色氨酸和酪氨酸代谢途径相关。将二者联合分析后确定了6个关键靶点进行验证:MAOA、MAOB、CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1和ADH1C。与模型组相比,XZDLD显著降低了MAOA、MAOB和CYP1B1蛋白的表达(P=0.024;P=0.004;P=0.039),并升高了CYP1A1、CYP1A2和ADH1C的表达(P=0.033;P=0.045;P=0.027)。结论:芎芷地龙汤可以改善大鼠偏头痛样行为,提高痛阈,其作用机制可能与调节色氨酸和酪氨酸代谢途径有关,为其临床应用提供依据,同时为偏头痛研究提供思路。

关键词： 粉防己碱   黑色素瘤   上皮间质转化   增殖   迁移   侵袭   AKT/NF-κB/CREB通路   小鼠  

摘要： 目的观察粉防己碱对黑色素瘤细胞B16增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其对上皮间质转化(EMT)的作用及潜在调控机制。方法(1)以0、2、4、6、8、10μmol·L^(-1)粉防己碱干预B16细胞24、48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况。1、2、4μmol·L^(-1)粉防己碱干预后,通过平板克隆形成实验检测B16细胞集落形成能力;通过细胞划痕实验及Transwell小室侵袭实验检测B16细胞的迁移、侵袭能力;采用Western Blot法检测B16细胞EMT相关的N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况。通过尾静脉注射B16细胞复制小鼠黑色素瘤肺转移模型,观察粉防己碱(50、100 mg·kg^(-1))灌胃给药对小鼠肺部转移肿瘤结节数的影响。(2)利用CTD、Swiss Target Prediction和Similarity Ensemble Approach数据库预测粉防己碱的作用靶点;通过Gene Cards数据库检索黑色素瘤疾病相关靶点;取二者的交集靶点,即为粉防己碱治疗黑色素瘤的潜在作用靶点。将交集靶点导入STRING数据库,构建蛋白互作(PPI)网络,筛选核心靶点;将交集靶点导入DAVID数据库进行GO功能及KEGG通路富集分析。利用Auto Dock软件对粉防己碱与核心靶点进行分子对接验证。(3)体外实验验证:1、2、4μmol·L^(-1)粉防己碱干预后,采用Western Blot法检测关键通路AKT/NF-κB/CREB通路相关蛋白的表达;并利用AKT激动剂SC79进行回复实验验证。结果(1)粉防己碱干预B16细胞24、48 h的IC50分别为4.273、4.085μmol·L^(-1)。与对照组比较,1、2、4μmol·L^(-1)粉防己碱组的细胞集落形成能力、划痕愈合率及侵袭率均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);细胞Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01,P<0.001),E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.01,P<0.001)。与模型对照组比较,粉防己碱高剂量组小鼠的黑色素瘤肺转移结节数量明显减少(P<0.05)。(2)共得到60个粉防己碱治疗黑色素瘤的潜在作用靶点;进一步筛选出AKT1、TNF、CCND1、RELA、CASP9、CHUK、CREBBP等核心靶点,其中AKT1为相互作用最强的靶点;主要涉及细胞凋亡、Fox O、TNF、PI3K-AKT、NF-κB等信号通路。分子对接显示,粉防己碱与AKT1、TNF、RELA等核心靶点均有较强的结合活性。(3)与对照组比较,粉防己碱1、2、4μmol·L^(-1)组细胞的p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-CREB/CREB蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01);SC79组细胞的p-AKT、p-NF-κB p65蛋白表达显著上调(P<0.001)。与SC79组比较,2μmol·L^(-1)粉防己碱+SC79组细胞的p-AKT、p-NF-κB p65、p-CREB蛋白表达显著下调(P<0.001)。结论粉防己碱可能通过调控AKT/NF-κB/CREB通路抑制小鼠黑色素瘤的增殖、迁移、侵袭及EMT,进而抑制小鼠黑色素瘤肺转移。

关键词： 半枝莲   山慈菇   卵巢癌   网络药理学   分子机制   实验验证  

摘要： 目的基于网络药理学和体外细胞实验,研究半枝莲-山慈菇治疗卵巢癌的主要活性成分和潜在作用机制。方法利用TCMSP、SwissTargetPrediction数据库检索半枝莲和山慈菇的活性成分和作用靶点,并通过GeneCards、OMIM、DrugBank、DisGeNET数据库收集卵巢癌相关作用靶点。筛选半枝莲-山慈菇干预卵巢癌的交集靶点,利用STRING数据库构建交集靶点PPI网络。利用DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析;采用Cytoscape 3.9.0软件构建"活性成分-靶点-通路"网络。对关键靶点和通路进行体外实验验证,采用MTT法检测不同浓度槲皮素、谷甾醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制率。将人卵巢癌SKOV3细胞按随机数字表法分为对照组、槲皮素组和谷甾醇组,相应药物干预48 h后,采用克隆形成实验检测槲皮素、谷甾醇对SKOV3细胞克隆形成能力的影响,采用PCR检测各组细胞Akt1、VEGFA、Caspase-3 mRNA水平,采用Western blot法检测细胞PI3K、Akt、p-Akt、Caspase-3、VEGFA蛋白表达。结果得到半枝莲有效成分29个,山慈菇有效成分3个,其中共有成分2个;药物相关作用靶点291个;卵巢癌潜在靶点1969个;半枝莲-山慈菇与卵巢癌的交集靶点137个。通过GO功能富集分析得到930个条目,涉及生物过程722个、细胞组分76个、分子功能132个。KEGG通路富集涉及169条信号通路,涉及肿瘤通路、PI3K-Akt信号通路、p53信号通路、IL-17信号通路等。体外实验结果显示,槲皮素和谷甾醇组细胞增殖抑制率升高,细胞克隆能力降低;槲皮素组、谷甾醇组Akt1、VEGFA mRNA水平降低(P<0.01或P<0.05),Caspase-3 mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),PI3K、p-Akt、VEGFA蛋白表达降低(P<0.01)。结论半枝莲-山慈菇通过多靶点、多通路协同作用抑制卵巢癌的发生发展,可通过调控AKT1、VEGFA、Caspase-3等关键基因和PI3K-Akt通路的表达诱导SKOV3细胞凋亡。

关键词： 辣木叶   网络药理学   分子对接   活性成分   肠炎  

摘要： 本研究旨在采取网络药理学与分子对接技术探究辣木叶水溶性活性成分治疗肠炎的作用机制。通过文献检索搜集辣木叶水溶性活性成分,在PubChem数据库获取化学结构,通过Swiss Target Prediction数据库预测潜在靶点,同时检索GeneCards数据库获取辣木叶活性成分与肠炎重合靶点;随后将上述重合靶点导入STRING数据库构建蛋白质互作(PPI)网络,通过Cytoscape软件CytoNCA插件筛选核心靶点,随后经DAVID数据库对筛选的核心靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,并运用R语言clusterProfiler程序包分析关键通路富集靶点情况,最后经Autodock-Tools软件将核心靶点以及活性成分进行分子对接。结果表明:1)筛选出的辣木叶水溶性活性成分主要包括芥子酸、肉桂酸、山奈酚、槲皮素、柚皮素、辣木碱、niazimin A和原儿茶酸等31种,其对应的核心靶点有35个。2)PPI网络分析结果发现,SRC原癌基因非受体酪氨酸激酶(SRC)、表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶9(MMP9)以及蛋白激酶B1(AKT1)、前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)和热休克蛋白90α家族A类成员1(HSP90AA1)等是辣木叶治疗肠炎的关键靶点。3)KEGG信号通路富集分析发现,筛选的核心靶点主要参与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)、Toll样受体(TLR)、肿瘤坏死因子(TNF)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和NOD样受体等信号通路,并通过EGFR、MMP9、RELA原癌基因核因子-κB亚基(RELA)、SRC、AKT1、核因子-κB亚基1(NFKB1)、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、Toll样受体4(TLR4)、HSP90AA1、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、血管内皮生长因子A(VEGFA)和CREB结合蛋白(CREBBP)等起到治疗肠炎的作用。4)分子对接预测结果表明,芥子酸和niazimin A与关键靶点均能稳定结合。综上可知,辣木叶活性成分可通过相应的信号通路发挥抗炎、抗病毒作用,同时也可调节细胞分化、凋亡等生物过程,这为辣木叶在肠道性疾病中的进一步发展和应用提供了理论基础。