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关键词： 案例分析   PBL教学模式   药理学   毛果芸香碱   教学改革  

摘要： 药理学指导临床合理用药,是医学专业学生的核心课程,目前药理学教学存在课堂枯燥、学生课堂参与度不高、学习靠死记硬背、理论脱离实践等"痛点".在药理学教学中,采用临床案例教学,让学生通过分析案例对知识进行探究性学习,可以有效地理论联系实践、基础联系临床.同时以案例提出问题开展PBL教学,在课堂上进行翻转教学,可以培养学生自主学习的能力、解决问题的能力、团结协作能力和语言表达能力.文章以胆碱受体激动药一章中的代表药物毛果芸香碱为例,从课前课中课后三方面进行了基于临床案例的PBL教学模式的教学设计.实践说明基于案例的PBL教学模式可以有效提高学习效果和教学质量.

关键词： 网络药理学   桃红四物汤   股骨头坏死   TGF-β/Smad  

摘要： 目的:利用网络药理学和实验研究,探讨THSWD治疗股骨头坏死的潜在机制,并进行初步实验验证。方法:从TCMSP、Uniprot中提取桃红四物汤中的有效活性成分及有效靶点,构建成分-靶点-疾病网络,构建蛋白-蛋白相互作用网络,并进行富集分析,并通过KEGG通路分析及GO富集分析,以发现潜在的治疗机制。并通过Western blot检测BMP-2、BMP-4、Smad1、Smad5、Smad8、Runx2、Osterix等蛋白相对表达量。结合细胞实验验证网络药理学的结果。结果:经ADME过滤分析及查询相关疾病靶点基因数据库,共获得了862个不同的股骨头坏死靶基因和196个THSWD靶基因。这些靶点在不同的信号通路和多种基因功能富集。我们发现PTGS2、PTGS1、TNFRSF1A、VEGFA等为重要的靶点基因。通过探索各种不同的信号通路,我们发现MAPK信号通路、HIF-1信号通路、NF-κB信号通路、IL-17信号通路、TNF信号等通路在桃红四物汤治疗股骨头坏死中具有潜在的重要作用。结合细胞试验,桃红四物汤还可以促进BMSC细胞增殖。促进BMP-2、BMP-4、Smad1、Smad5、Smad8、Runx2、Osterix等蛋白表达,并减少骨纤维化、促进骨形成和诱导成骨细胞分化,诱导局部血管新生及新骨生成从而促进骨损伤的修复与重建,从而治疗股骨头坏死。结论:该研究证实了桃红四物汤防治股骨头坏死具有多成分、多靶点、多通路的特点,能为桃红四物汤的临床用药提供一定的理论参考和新药研发提供实验依据。

关键词： 网络药理学   分子对接   龙葵   肿节风   PI3K-Akt信号通路   药对  

摘要： 目的本研究目的是通过网络药理学及分子对接方法探寻龙葵-肿节风药对治疗胃癌的作用机制。方法通过TCMSP数据库收集龙葵-肿节风药对活性成分;在TTD、DrugBank、Pharmgkb等疾病靶点数据库搜索汇总出胃癌基因靶点。利用Cytoscape软件构建“龙葵-肿节风药对活性成分—胃癌交集靶点”关系网络图。使用String数据库构建靶点蛋白相互作用网络(PPI)并用Cytoscape软件筛选出得出核心靶点。同时利用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集从宏观角度分析核心靶点,并通过Autodock软件进行分子对接验证主要成分-核心靶点结合活性。结果我们确定了龙葵-肿节风药对主要的药物活性成分主要是槲皮素和β-谷甾醇;核心靶点分别为AKT1、TNF、IL6、TP53和IL1B。KEGG富集分析表明,PI3K-Akt信号通路及炎症相关信号通路可能是重要的通路。GO分析提示主要涉及的生物过程包括对激素的反应、细胞对氮化合物的反应、对异生刺激的反应等;参与的分子功能包括转录因子结合、蛋白质均二聚活性、蛋白质结构域特异性结合等;涉及的细胞组分主要是膜筏、转录调节复合体、质膜蛋白复合物等。分子对接结果表明,主要活性与核心靶点具有良好的结合活性。结论研究表明,龙葵-肿节风药对可能主要通过作用于AKT1、TNF、IL6、TP53和IL1B等靶点,进而调控PI3K-Akt通路、炎症等相关通路,从多靶点、多通路发挥治疗胃癌的作用。本研究为后续开展龙葵-肿节风药对抗胃癌的体内外实验研究奠定了基础。

关键词： 金水六君煎   气道黏液高分泌   细胞实验   人支气管上皮细胞  

摘要： 目的:通过网络药理学挖掘金水六君煎治疗气道黏液高分泌的潜在靶点,并采用体外实验探究金水六君煎对人支气管上皮细胞黏液高分泌的干预作用及作用机制。方法:采用网络药理学预测金水六君煎治疗气道黏液高分泌潜在靶点。将24只雄性SPF大鼠随机分为2组,中药组与正常组分别用金水六君煎[5.26g/(kg·d)]和等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,5 d后麻醉下取大鼠含药血清和正常血清;将第5代人支气管上皮细胞分为正常组、模型组、不同浓度(10%、15%、20%)含药血清组、阿奇霉素组;正常组予常规培养液培养12 h后,加入15%正常大鼠血清干预12 h;其余各组采用香烟提取物(CSE)联合脂多糖(LPS)干预12h构建人支气管上皮细胞黏液高分泌模型,模型组干预后,加入15%正常大鼠血清干预12 h;不同浓度含药血清组干预后,分别加入10%、15%、20%含药血清继续干预12 h;阿奇霉素组干预后,加入含25μmol/L阿奇霉素血清继续干预12 h。采用CCK8检测细胞活力;采用Western blot法验证潜在靶点。结果:网络药理学预测黄芩素、松柏苷是与疾病靶点连接最广泛的活性物质,蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络与分子对接发现关键靶点可能为基质金属蛋白酶9(MMP9)、血管内皮生长因子(VEGF)。实验研究结果显示,干预后各组细胞活性较正常组降低(P<0.05),15%含药血清组和阿奇霉素组细胞活性较模型组升高(P<0.05),10%、20%含药血清组细胞活性较阿奇霉素组低(P<0.05)。黏蛋白5AC(MUC5AC)是黏液高分泌的重要蛋白,其表达增加代表模型建立成功。干预后各组MMP9、VEGF、MUC5AC蛋白相对表达量较正常组增加(P<0.05),15%含药血清组和阿奇霉素组MMP9、VEGF、MUC5AC蛋白相对表达量较模型组降低(P<0.05)。结论:金水六君煎对MUC5AC、MMP9、VEGF呈现抑制作用,揭示其机制可能是通过多靶点、多成分作用于气道黏液高分泌。

关键词： 紫龙金片   非小细胞肺癌   网络药理学   分子对接   作用机制  

摘要： 目的:利用网络药理学和分子对接的方法初步探究紫龙金片主要成分治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的可能分子机制。方法:在中药系统药理学分析平台(TCMSP)中检索并提取紫龙金片主要成分(黄芪、当归、龙葵、丹参、半枝莲和郁金)的有效活性成分及相关作用靶点;通过GeneCards、DisGeNET以及OMIM数据库筛选出NSCLC相关基因作为疾病靶点。将有效成分靶点与疾病靶点取交集,运用STRING数据库构建疾病和药物共同靶点的蛋白⁃蛋白相互作用网络,使用Cytoscape 3.9.0软件CytoNCA插件筛选并明确紫龙金片主要成分治疗NSCLC的关键作用靶点。利用“clusterProfiler”R包对核心靶点基因进行GO和KEGG富集分析,并构建成分⁃靶点⁃通路网络图。最后对核心靶点及其相应成分进行分子对接验证。结果:通过筛选得到的药物有效活性成分175个,作用于860个靶点。药物靶点与疾病靶点的交集靶点共800个。通过Cytoscape 3.9.0软件蛋白互作网络的拓扑分析确定SRC、RELA、ESR1、HSP90AA1、EP300、STAT3、PIK3R1、AR、CREBBP、EGFR、EZH2、HRAS、MAPK1、MAPK3、JUN、HDAC1和PTPN11等可能是复方紫龙金片作用于NSCLC的关键靶点。对关键靶点的GO功能富集得到了1505个条目,包括生物过程1330个、分子功能117个、细胞组分58个。KEGG通路富集得到144条通路,大多涉及癌症相关的途径。分子对接结果表明活性成分与关键靶点之间具有较好的结合性。结论:本研究初步探索了紫龙金片主要成分治疗NSCLC的基本药理作用,其具有多成分、多靶点、多通路的特点。

关键词： 化瘀消癥颗粒   异位妊娠   JAK/STAT通路   网络药理学研究  

摘要： 目的本文旨在通过网络药理学和体外实验,研究化瘀消癥颗粒治疗异位妊娠(EP)的作用机制。方法筛选化瘀消癥颗粒的潜在有效成分,建立了PPI、MCODE、GO富集和KEGG途径分析。在JAK/STAT通路抑制剂与激动剂对照下,通过划痕实验和Transwell实验分别检测化瘀消癥颗粒对滋养细胞(HTR-8/SVneo细胞)迁移和侵袭的影响,通过Western blot检测化瘀消癥颗粒对JAK/STAT通路及相关蛋白的影响。结果共获得375个活性成分、45个已知靶点和207个预测靶点,通过构建PPI网络筛选出STAT3、MMP9、TLR4、HIF1-α等15个关键目标。划痕实验提示化瘀消癥颗粒对HTR-8/SVneo细胞迁移具有抑制作用,呈时间、剂量依赖性;化瘀消癥颗粒作用48 h后,Transwell实验提示HTR-8/SVneo细胞的过膜细胞数明显下降(P<0.05);Western blot实验提示,JAK/STAT信号通路蛋白表达显著降低(P<0.05);与JAK/STAT通路相关的uPA、HIF1-α和N-cadherin蛋白表达均受到抑制(P<0.05),趋势与通路抑制剂AG490一致,与通路激动剂IL-6相反。结论化瘀消癥颗粒抑制JAK/STAT通路及其相关蛋白uPA、HIF1-α和N-cadherin的表达,影响HTR-8/SVneo细胞的迁移和侵袭活性,这有助于阐明化瘀消癥颗粒治疗异位妊娠(EP)的作用机制。

关键词： 益肺散结方   网络药理学   肺腺癌   体外细胞实验   分子对接   JAK2/STAT3/VEGF信号通路  

摘要： 目的基于网络药理学预测益肺散结方治疗肺腺癌的潜在作用机制,并通过体外细胞实验对关键信号通路之一Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路进行实验验证。方法利用中药系统药理数据库(TCMSP)筛选益肺散结方的主要活性成分和潜在作用靶点。通过人类基因数据库(GeneCards)和在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索获取肺腺癌主要靶点。运用韦恩图获取两者的交集靶点,通过Cytoscape3.7.2进行拓扑学分析,并建立中药-活性成分-靶点网络图。采用蛋白质相互作用平台(STRING)与Cytoscape3.7.2软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。应用Metascape数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。借助Vina 1.2.3软件进行分子对接验证。通过CCK-8法检测益肺散结方对细胞活性的影响,细胞划痕实验观察对细胞迁移的影响,Western blot法检测p-STAT3、STAT3、p-JAK2、JAK2、VEGF-A表达。结果获取益肺散结方活性成分94种,相关药物靶点329个,肺腺癌靶点1358个,二者交集150个。PPI网络可视化分析显示,益肺散结方治疗肺腺癌的潜在关键靶点为:蛋白激酶B1(AKT1)、β-肌动蛋白(ACTB)、抑癌基因P53(TP53)、血清白蛋白(ALB)、caspase-3(CASP3)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。KEGG富集分析筛选了138条相关信号通路,显示JAK/STAT信号通路可能在益肺散结方治疗肺腺癌的过程中起到关键作用。分子对接结果表明槲皮素、木犀草素、熊果酸与JAK2、STAT3之间均有较好的结合活性。细胞实验表明,与空白组比较,益肺散结方可显著抑制A549细胞活性(P<0.01),抑制A549细胞迁移(P<0.01),同时能降低p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、VEGF-A蛋白表达(P<0.05),此外,JAK2/STAT3通路激活剂Colivelin可逆转益肺散结方对A549相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论益肺散结方治疗肺腺癌具有多成分、多靶点、多通路的特点,其作用机制可能与下调p-JAK2、p-STAT3、VEGF-A蛋白的表达,进而抑制细胞增殖和迁移有关。

关键词： 单纯性肥胖   复方降脂口服液   网络药理学   分子对接   提取工艺  

摘要： 为了优选复方降脂口服液的提取工艺,通过网络药理学及分子对接技术分析复方降脂口服液中的功效成分,结合正交设计实验确定最佳提取工艺。结果表明,复方降脂口服液中的主要活性成分为异鼠李素、山柰酚、槲皮素等黄酮类化合物,作用于AKT1、IL6、PPARG等关键靶点,通过胰岛素抵抗、脂肪分解、AMPK等信号通路,发挥治疗单纯性肥胖的作用;以功效成分总黄酮含量及干膏得率为评价指标,正交设计试验得出最佳提取工艺条件为:焦山楂、赤小豆、决明子、茯苓、薏苡仁、枸杞子6味药加1 500 mL水浸泡60 min,煎煮45 min后下荷叶、陈皮、玫瑰花共煎25 min。可见复方降脂口服液以多成分-多靶点-多通路途径治疗单纯性肥胖,通过网络药理学及分子对接确定工艺评价指标,优选的工艺稳定,可为口服液产品开发奠定基础。

关键词： 贯叶金丝桃   黄酮   缺血性脑损伤   网络药理学   INS   VEGFA   TNF-α  

摘要： 目的基于网络药理学和动物实验探讨贯叶金丝桃黄酮类成分对缺血性脑损伤的治疗作用。方法检索中草药药理学分析平台及文献数据库获取贯叶金丝桃黄酮类活性成分,采用TTD、DrugBank、SwissTargetPredicition数据库筛选活性成分对缺血性脑损伤的治疗靶点,借助Cytoscape软件构建“成分-靶点-疾病”网络;利用String数据库分析靶点间作用关系,通过网络节点中心性和网络模块分析筛选关键靶点;使用Metascape数据库对靶点进行GO和KEGG通路富集分析;最后建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,通过检测脑梗死面积比例、病理学和INS、VEGFA、TNF-α蛋白表达验证贯叶金丝桃总黄酮的治疗作用及关键作用靶点。结果贯叶金丝桃中黄酮类活性成分有11个,其抗缺血性脑损伤的潜在靶点有76个,关键靶点为INS、VEGFA、TNF、MAPK1、TP53、FOS;关键靶标可作用于有缺氧反应中RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、急性炎症反应的负调控和神经元投射维持等生物过程,主要通过癌症通路、PI3K-Akt信号通路以及流体剪应力与动脉粥样硬化等通路发挥作用。动物实验表明,贯叶金丝桃总黄酮能够降低MCAO大鼠脑梗死面积比例和INS、VEGFA、TNF-α蛋白表达(P<0.01),改善缺血性脑组织皮层病变,促进神经元细胞形态结构恢复。结论贯叶金丝桃总黄酮对缺血性脑损伤的治疗作用可能是通过调控INS、VEGFA和TNF-α表达实现的。