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关键词： 芍药内酯苷   阿尔茨海默病   ERK1/2   MAPK/ERK   网络药理学   分子对接  

摘要： 基于网络药理学、分子对接技术和体外实验研究芍药内酯苷治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)的作用机制。采用网络药理学预测芍药内酯苷抗AD的潜在作用靶点和通路,结合分子对接技术对芍药内酯苷与关键靶蛋白进行分子对接验证,最后使用芍药内酯苷干预Aβ25-35诱导大鼠嗜铬瘤细胞(PC12细胞)所构建的AD细胞模型,以验证核心靶点和通路。网络药理学分析结果显示,芍药内酯苷主要作用于丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1,又称ERK2)、白蛋白(ALB)、表皮生长因子受体(EGFR)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)、5-羟色胺转运体(SLC6A4)等关键靶点和MAPK、cAMP、cGMP-PKG等信号通路。分子对接结果表明芍药内酯苷与MAPK1(ERK2)有较好的结合性。体外实验显示,与空白组相比较,模型组细胞活力显著下降,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达水平显著降低,Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平显著升高,细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平和p-ERK1/2与ERK1/2相对表达量比值均显著下降;与模型组相比较,芍药内酯苷组细胞活力显著升高,Bcl-2的表达量上调,Bax表达量下调,ERK1/2磷酸化水平和p-ERK1/2与ERK1/2相对表达量比值显著增加。研究结果提示芍药内酯苷抗AD的作用机制可能与其激活MAPK/ERK信号通路,进而抑制神经细胞凋亡有关。

关键词： 血清药理学   补阳还五汤   星形胶质细胞   缺氧缺糖/复氧复糖   离体实验  

摘要： 目的探讨不同浓度补阳还五汤含药血清对缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)损伤大鼠星形胶质细胞系CTX-TNA2的修复作用。方法将处于对数生长期的CTX-TNA2细胞系分为观察组、血清组、模型组、正常组。正常组不做任何处理,常规培养;模型组弃去原培养基,加入不含糖、含钙镁的无糖培养基6 h(缺氧缺糖处理),然后把无糖培养基全部更换为完全培养基培养24 h(复氧复糖);观察组和血清组细胞缺氧缺糖处理6 h后,分别用含0.5%、1%、3%、5%、10%补阳还五汤含药血清(观察1、2、3、4、5组)或含0.5%、1%、3%、5%、10%空白血清(血清1、2、3、4、5组)的完全培养基培养24 h。采用MTS法检测细胞存活率,LDH法检测细胞乳酸脱氢酶漏出率,倒置相差显微镜观察细胞状态。结果与正常组相比,模型组细胞存活率降低,且乳酸脱氢酶漏出率升高(P均<0.01);与模型组比较,观察组细胞存活率升高(P<0.01)、乳酸脱氢酶漏出率降低(P<0.01);与血清4组比较,观察4组细胞存活率高(P<0.01)、乳酸脱氢酶漏出率低(P<0.05)。观察组细胞的胞体状态和胞间突起较模型组有所恢复,且比血清组细胞好转更显著。结论与其他浓度的补阳还五汤含药血清比较,5%补阳还五汤含药血清可修复CTX-TNA2细胞OGD/R损伤。

关键词： 抗腮腺炎糖浆   流行性腮腺炎   网络药理学   分子对接  

摘要： 目的基于网络药理学和分子对接探讨抗腮腺炎糖浆治疗流行性腮腺炎的作用机制。方法通过TCMSP、PubChem、Swiss Target Prediction等数据库,挖掘抗腮腺炎糖浆化学成分和潜在靶点;使用GeneCards、OMIM和Drugbank数据库获取流行性腮腺炎相关靶点;绘制韦恩图找到抗腮腺炎糖浆作用靶点与流行性腮腺炎相关靶点的交集;利用STRING数据库构建蛋白质相互作用网络,筛选核心作用靶点;采用Cytoscape软件绘制中药-成分-疾病靶点网络;使用Metascape平台寻找核心作用靶点富集的通路和功能;通过Auto Dock Vina等软件完成有效药物成分与核心靶点蛋白的分子对接验证。结果挖掘到抗腮腺炎糖浆化合物96个,药物作用靶点823个,选取疾病靶点732个,通过韦恩图找到交集靶点87个,筛选核心靶点36个,通过富集分析得到KEGG通路112条,GO生物过程892条,GO细胞组成22条,GO分子功能58条;分子对接结果显示核心靶点与有效成分之间具有较高的结合活性。结论抗腮腺炎糖浆可能通过调控IL-6、TNF、STAT3、HSP90AA1、IL-1B、TP53、IL10、TLR4、EGFR、CCL2等靶点,以及脂质与动脉粥样硬化相关通路、癌症相关通路、疟疾相关通路、IL-17信号通路、炎性肠病通路、Th17细胞分化、TNF信号通路等通路发挥治疗流行性腮腺炎作用,为诠释抗腮腺炎糖浆临床治疗流行性腮腺炎的机制提供了依据。

关键词： 石榴皮   网络药理学   非酒精性脂肪性肝炎   细胞实验   分子机制  

摘要： 目的基于网络药理学和细胞实验验证的方法探讨石榴皮改善非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)作用机制。方法利用中药系统药理学数据库(TCMSP)进行条件检索,获取石榴皮的活性成分及其对应的作用靶点。利用人类基因数据库(GeneCards)等5个数据库获取NASH相关的靶点。将获得的石榴皮和NASH靶点进行筛选,通过韦恩图得到共同靶点。使用蛋白相互作用数据库(STRING)构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,并用Cytoscape 3.7.1建立“石榴皮-成分-靶点-NASH”网络。利用Metascape软件进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析。最后借助人肝癌细胞HepG2观察石榴皮中主要活性成分对NASH的影响。结果石榴皮活性成分有7个,获得靶点基因191个,NASH靶点1818个,两者交集靶点98个,拓扑学分析显示,石榴皮治疗NASH的核心成分为槲皮素、山奈酚和木犀草素,核心靶点为蛋白激酶B(protein kinase B,Akt1)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等。KEGG通路分析结果显示石榴皮治疗NASH主要涉及磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/Akt、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)等信号通路。体外细胞试验结果显示,与对照组相比,模型组磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-Akt^(Thr308),p-Akt^(Thr308))、IL-6等蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,石榴皮活性成分可显著降低p-AktThr308、IL-6等蛋白的表达水平(P<0.05),也能够降低IL-6、TNF-α基因的mRNA表达水平(P<0.05)。结论石榴皮可通过多成分、多靶点、多通路发挥抗NASH的作用,其机制可能与石榴皮中活性成分槲皮素、山奈酚和木犀草素影响Akt1等核心靶点及调控PI3K/Akt、NF-κB等信号通路,进而抑制相关炎症因子表达有关。

关键词： 银屑病   清热凉血   数据挖掘   网络药理学  

摘要： 目的 探讨清热凉血药在名老中医治疗银屑病中的组方规律,分析其潜在作用机制,为银屑病的临床遣方用药和新药开发提供依据。方法 筛选出若干本中医著作中名老中医用清热凉血药治疗银屑病的方剂,运用Microsoft Excel 2010计算中药用药频数,SPSS Clementine 12.0软件的Apriori版块和R软件的arules、arulesViz插件进行关联规则分析。选取核心药物在TCMSP数据库获取有效活性成分,在SwissADME平台进行药动学参数筛选,并将活性成分导入至SWisstargetprediction中预测药物靶点。在Gene Card、TTD、DrugBank、Dis Ge NET、OMIM等疾病数据库中获取银屑病疾病靶点,利用Cytoscape3.8.2中的BisoGent插件和CytoNCA插件进行核心作用靶点筛选,所得核心靶点利用R软件进行基因功能注释(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析。结果 共纳入181个方剂,涉及215种中药,用药频次≥17的高频中药有35种,频次最高的药物是生地黄。关联规则分析显示最常用的药对配伍是生地黄-牡丹皮,提升度最高的药物配伍是金银花-连翘。核心药物配伍是生地黄、牡丹皮、赤芍、紫草。它们共有62个有效成分,关键成分可能是异戊酰紫草素、乙酰紫草根素、黄芩素、木犀草素、山柰酚,其中筛选出376个核心靶点。GO分析和KEGG富集分析显示核心药物可能通过神经营养因子信号通路、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B,PI3K-Akt)信号通路和缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)信号通路等发挥作用。结论 治疗银屑病方剂使用清热凉血药为主,同时辅以活血化瘀、养血解毒、祛风止痒、破血祛瘀之法,且注重祛邪不忘扶正。核心药物作用机制可能是通过异戊酰紫草素、乙酰紫草根素、黄芩素、木犀草素、山柰酚等活性成分作用于神经营养因子信号通路、PI3K-Akt信号通路和HIF-1信号通路等发挥抗炎、调节免疫反应、调控转录水平、血管损伤修复的作用。本研究可为银屑病的临床遣方用药和新药开发提供一定参考。

关键词： 网络药理学   分子对接   大血藤   败酱草   结直肠癌  

摘要： 目的采用网络药理学和分子对接技术分析大血藤-败酱草抗结直肠癌的分子机制。方法首先采用公共数据库挖掘大血藤-败酱草的相关活性成分和靶点以及结直肠癌的相关靶点,筛选出结直肠癌治疗的潜在靶点。然后进行中药-成分-靶点网络和蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析,采用基因本位(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析治疗结直肠癌涉及的分子功能、细胞成分、生物过程及相关通路,并构建靶点-通路网络,筛选结直肠癌治疗的关键靶点。最后采用分子对接技术评价关键成分与靶点的亲和力。结果大血藤-败酱草治疗结直肠癌的成分主要是芹菜素、槲皮素、大黄素等,涉及促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)1、MAPK3、蛋白激酶B丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、磷脂酰肌醇-4,5二磷酸3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)等多个靶点。GO分析主要富集于蛋白质磷酸化、蛋白激酶活性、转录调控复合物等方面;KEGG通路富集分析显示,癌症通路、表皮生长因子受体(EGFR)-酪氨酸激酶抑制剂(TKI)耐药性、磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路等均是结直肠癌治疗的重要通路。芹菜素、槲皮素、大黄素与MAPK1、MAPK3和PIK3CA均有强烈亲和力,与AKT1亲和力较好,芹菜素-PIK3CA、槲皮素-MAPK1、大黄素-PIK3CA能够形成相对稳定的复合物。结论大血藤-败酱草可能通过抑制MAPK1、MAPK3、和PIK3CA靶蛋白的表达,通过调控PI3K/AKT、MAPK信号通路介导的细胞增殖、迁移和凋亡等过程发挥抗结直肠癌作用。

关键词： 滇重楼   抗肺癌   UPLC-Q-TOF-MS/MS   网络药理学  

摘要： 目的基于UPLC-Q-TOF-MS/MS法结合网络药理学研究滇重楼抗肺癌活性成分。方法滇重楼70%甲醇提取物的分析采用ACQUITY UPLCTM HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸-乙腈;体积流量0.3 mL/min;电喷雾(ESI)离子源;负离子模式。通过网络药理学预测活性成分作用靶点、疾病相关靶点、成分-疾病-靶点相互关系,筛选调控疾病靶点的关键成分和相关作用靶点,并得到相关的调控通路。结果滇重楼提取物中共鉴定出26个化合物,包括17个异螺甾烷醇型(9个薯蓣皂苷型、8个偏诺皂苷型)、1个螺甾烷醇型、1个C 21甾体化合物、2个黄酮类、1个其他类。活性成分进行靶点预测,与肺癌共性靶点91个。活性成分-靶点网络和肺癌靶点PPI网络分析表明,dioscinin、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅴ为滇重楼治疗肺癌的关键成分。重楼治疗肺癌KEGG分析发现,PI3K-Akt、Ras、MAPK等信号通路,为重楼活性成分调控肺癌的主要信号通路。结论本研究明确了重楼抗肺癌的关键活性成分、相关调控通路,为滇重楼抗肺癌新药的研制提供理论基础。

关键词： 药理学   批判性思维   批判性思维技能   考试成绩   教学改革  

摘要： 通过抽样调查医学生(包括临床医学专业本科生和护理学专业本科生)批判性思维技能水平的现状,探索其与医学专业课程药理学期末笔试成绩的相关性。结果表明:五年制临床医学专业本科生和护理学专业本科生批判性思维技能的平均水平都较低,其中,约54.17%的学生批判性思维技能水平处于弱及弱以下;个体相关性研究显示,医学生批判性思维技能水平与其医学专业课程药理学期末笔试成绩呈正相关。由此可见,目前临床医学专业和护理学专业本科生的批判性思维技能水平亟须大力提高。研究结果也提示,医学生批判性思维技能水平的提高,对其医学专业课程的学习具有非常重要的积极意义。因此,医学院校应从多角度、多层次、多途径加强对医学生批判性思维技能的培养,以适应现代医学对医学人才的需求。

关键词： 阿尔茨海默病   葛根素   网络药理学   分子对接   作用机制   中药研究  

摘要： 目的运用网络药理学及分子对接的方法探究葛根素(Pue)干预阿尔茨海默病(AD)的分子作用机制,并进行动物实验验证。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、集成药效团匹配平台(PharmMapper)等获取Pue的作用靶点,利用人类基因综合数据库(GeneCards)获取AD相关靶点,映射后获取交集靶点,应用Cytoscape v3.9.1软件构建蛋白质相互作用网络图,并筛选出核心靶点进行基因功能富集分析、信号通路分析和分子对接;通过基因鉴定将5月龄的早老素1/2条件性双基因敲除(PS cDKO)小鼠给予Pue(100 mg/kg)的腹腔注射治疗,然后进行行为学测试,测试结束后取材进行分子生物学检测。结果通过筛选获得Pue干预AD的核心靶点共118个。基因本体论(GO)功能富集分析得到148个条目(P<0.05),其中生物过程条目100个,细胞组成条目23个,分子功能条目25个;京都基因和基因组百科全书数据库(KEGG)通路分析富集得到11条信号通路(P<0.05),主要包括AD信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等。分子对接结果显示,Pue与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、白蛋白(ALB)、表皮生长因子受体(EGFR)、肿瘤坏死因子(TNF)、血管内皮生长因子A(VEGFA)可以对接。行为学结果显示,Pue可以改善PS cDKO小鼠受损的空间记忆(P<0.05)。免疫印迹(Western blot)结果显示,Pue下调了PS cDKO小鼠前额皮质中细胞外调节蛋白激酶(Erk1/2)的磷酸化水平的表达,并抑制了裂解的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)的表达水平。结论基于网络药理学和实验研究表明,Pue可以通过多靶点、多通路发挥对AD的干预作用,在临床和新药研发中具有参考价值。

关键词： 可可茶   茶多酚   降血糖   高分辨质谱   网络药理学  

摘要： 目的:探究可可茶茶多酚的组成特性及功能活性。方法:以可可茶多酚粗提物为研究材料,采用高分辨质谱分析并鉴定其组分;基于网络药理学预测其潜在功能。结果:经酶抑制试验证实可可茶具有显著抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的体外降血糖活性;通过GO功能分析和KEGG通路富集预测其作用机制,涉及GAPDH、AKT等6个关键靶点和PI3K-AKT等多条通路,通过构建“组分—靶点—通路”网络,结合各组分与淀粉水解酶结合的分子对接筛选出杨梅素、花青素等10种核心降血糖活性组分。结论:可可茶多酚粗提物通过多组分、多靶点、多通路可以共同发挥降血糖功效。