关键词:
天麻素
电化学
氧化代谢产物
神经保护
活性评价
对羟基苯甲醛-O-β-D-吡喃葡萄糖苷
对羟基苯甲酸-O-β-D-吡喃葡萄糖苷
摘要:
目的 采用电化学模拟技术制备天麻素体内I相氧化代谢产物,并确认其为潜在起效成分。方法 采用电化学模拟技术(μPrepcell电池及SynthesisTM制备型电池),优化电压、电解液、反应物浓度和体积流量等,制备天麻素体内I相氧化代谢产物。构建缺糖缺氧/复氧(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)诱导的PC12细胞模型,考察天麻素及其5个代谢产物的神经保护作用。结果 通过优化参数,确定薄层电化学电池(μPrepcell)模拟天麻素代谢为对羟基苯甲醛-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和对羟基苯甲酸-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的反应条件为:掺硼金刚石(borondopeddiamond,BDD)为工作电极,最佳底物浓度为100μmol/L,最佳电解液浓度为20 mmol/L甲酸铵水溶液-甲醇(1∶9),最佳体积流量为50μL/min,最佳电压为1.6 V。再利用电化学合成电池(SynthesisCell)进行大量制备,玻碳(reticulated glassy carbon,RGC)电极为工作电极,从240 mg天麻素中制备得到77 mg对羟基苯甲醛-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。神经保护活性评价表明天麻素及其5个代谢产物对OGD/R诱导的PC12细胞均具有较好的保护作用(P<0.05、0.01),且浓度为50μmol/L时,与天麻素相比,代谢产物对羟基苯甲醛-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和对羟基苯甲酸-O-β-D-吡喃葡萄糖苷神经保护作用相对显著(P<0.05),存活率分别提高了8.63%、9.42%,细胞凋亡率分别降低了29.27%、45.30%。Western blotting结果表明对羟基苯甲醛-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和对羟基苯甲酸-O-β-D-吡喃葡萄糖苷均可显著增加OGD/R诱导的PC12细胞B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达水平(P<0.01),降低Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinasparate protease-3,Caspase-3)蛋白表达水平(P<0.01)。结论 天麻素及其代谢产物均具有神经保护作用,首次应用电化学模拟新技术制备天麻素体内I相氧化代谢产物并初步阐明了其发挥神经保护作用的机制,为阐明天麻素的起效物质奠定基础。